詳細介紹
細胞名稱 家兔腎細胞;RABK3培養
形態特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一雌性家兔的腎組織。2006年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養條件 M-199:
with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
家兔腎細胞;RABK3培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-FGF1/FITC 熒光素標記酸性成纖維細胞生長因子Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Nestin/FITC 熒光素標記巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C11orf71 11號染色體開放閱讀框71抗體 規格 0.2ml
NT5C2 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ 0.5mg
HADHSC(mouse, rat) 英文名稱: 短鏈L-3羥烷基輔酶A脫氫酶抗體(小鼠,大鼠) 0.2ml
Rhesus antibody Rh RNF185 環指蛋白185抗體 規格 0.2ml
Anti-Nestin/FITC 熒光素標記巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
leptin 大鼠瘦素Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-E.coli O6 大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MUM1/FLJ14868 突變的黑色素瘤相關抗原1抗體 規格 0.2ml
MAC(Human membrane attack complex) ELISA Kit 人膜攻擊復合物 96T
phospho-SAPK3 (Thr183+Tyr185) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶磷酸酶p38γ抗體 0.2ml
CHRNA6 英文名稱: 型乙酰膽堿受體α6/AChRα6抗體 0.2ml
Anti-E.coli O6 大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit anti-Mouse IgA whole serum 兔抗小鼠IgA抗血清 1ml
LRRC2 英文名稱: LRRC2蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh DHRS4L2 短鏈脫氫酶/還原酶家族4樣2蛋白抗體 規格 0.2ml
Ang- I (Mouse angiotension I ) ELISA Kit 小鼠血管緊張素ⅠMulti-class antibodies規格: 48T
鏈霉素檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產/蜂蜜/奶
Anti-C-Myc/MYC/MTLC /FITC 熒光素標記C-Myc致癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Cytochrome P450 2D6/CYP2D6 /FITC 熒光素標記細胞色素P450 2D6抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Lp-PLA2/FITC 熒光素標記抗脂蛋白磷脂酶A2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CARD6 凋亡加強結構域蛋白6抗體 規格 0.2ml
DP-I/DSP(desmoplakin I ) 橋粒斑蛋白1抗原 0.5mg
HEXIM2 英文名稱: HEXIM2蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Shh Shh信號轉導通路膜蛋白受體抗體 規格 0.1ml
Anti-Lp-PLA2/FITC 熒光素標記抗脂蛋白磷脂酶A2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。