詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HBE-2品牌
形態(tài)特性
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 取材自引產(chǎn)的11周男性胚胎組織,該細(xì)胞由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
人胚胎氣管組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HBE-2品牌貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
CT ELISA Kit 大鼠降鈣素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ATF3/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FADD Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白 規(guī)格 0.1ml
CDT ELISA Kit 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白 96T
1-Mar 英文名稱: 膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體 0.2ml
alpha 1 Fetoprotein 英文名稱: 甲胎蛋白抗體 0.1ml
Anti-ATF3/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA Kit 大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-BNP/Biotin 生物素化腦鈉肽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FRG2B FRG2B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
IL-16(Human Interleukin 16) ELISA KIT 人白介素16 96T
Neurogenin 3 英文名稱: 神經(jīng)元素3抗體 0.1ml
ABP1 英文名稱: 植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體 1ml
Anti-BNP/Biotin 生物素化腦鈉肽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒,英文名:SAA ELISA KiISA Kit for Human V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1大鼠表皮生長(zhǎng)因子受體2(EGFR2)ELISA試劑盒,英文名:EGFR2 ELISA Kit大鼠Apelin蛋白(APLN)ELISA試劑盒,英文名:APLN ELISA KiISA Kit for Human Copper-transporting ATPase 1小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒,英文名:TNFsR-Ⅱ ELISA KiISA Kit for Human Advanced glycosylation end product-specific receptor小鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒,英文名:Cyclin-D1 ELISA KiISA Kit for Human Vasopressin-neurophysin 2-copeptin小鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒,英文名:ODF ELISA KiISA Kit for cholyglycine小鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒,英文名:Collagenase II ELISA Kit
ELISA Kit for Human Apolipoprotein L1小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒,英文名:AChRab ELISA KiISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 5小鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒,英文名:Resistin ELISA KiISA Kit for Human Cytosolic non-specific dipeptidase小鼠β-防御素1(β-BD-1)ELISA試劑盒,英文名:β-BD-1 ELISA KiISA Kit for Human Cathepsin K小鼠生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致基因α(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA試劑盒,英文名:GROα/CXCL1/MGSA ELISA KiISA Kit for Human Beta-defensin 129小鼠載脂蛋白A2(APOA2)ELISA試劑盒,英文名:APOA2 ELISA KiISA Kit for Human Electron transfer flavoprotein-ubiquinone oxidoreductase, mitochondrial小鼠脫氧吡啶酚(DPD)ELISA試劑盒,英文名:DPD ELISA KiISA Kit for Human Fascin-2小鼠前動(dòng)力蛋白2(PK2)ELISA試劑盒,英文名:PK2 ELISA Kit
終止液 12ml 進(jìn)口分裝
VIP Receptor 1 英文名稱: 血管活性腸肽受體-1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Beta-Catenin (Ser675) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
MMP-26(Matrix metalloproteinase-26) 基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DARC 英文名稱: Duffy血型趨化因子受體抗體 0.2ml
Anti-AT2R 血管緊張素Ⅱ受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Hp-IgG(Mouse Helicobacter pylori IgG) ELISA Kit 小鼠幽門(mén)螺旋菌IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CCL9/CCL10/MIP-1 Gamma/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EFR3A EFR3A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
(IL-2sR)ELISA Kit 大鼠白介素2可溶性受體 96T
Munc13 英文名稱: 神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白13抗體 0.1ml
ATP6V0D2 英文名稱: ATP6V0D2蛋白抗體 0.2ml
Anti-CCL9/CCL10/MIP-1 Gamma/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。