詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人胚胎膀胱組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HB-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 取材自引產(chǎn)的11周男性胚胎組織,由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,12;D13S317:9,11;D16S539:11,13;D18S51:12,13;D19S433:13,14;D21S11:29;D2S1338:17,23;D3S1358:16;D5S818:9,11;D7S820:10,12;D8S1179:10,13;FGA:21,25;TH01:7,9;TPOX:8,11;vWA:14,16;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚胎膀胱組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HB-2培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
CD36L1/SRB1 peptide 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Connexin 43(Ser368) 磷酸化Connexin 43蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
羊抗人纖維蛋白原純化抗體 1mg/10mg 國(guó)產(chǎn)
14-3-3 epsilon 英文名稱: 14-3-3E蛋白抗體 0.2ml
DCAF12 英文名稱: 癌中心體相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
化合物與血清白蛋白BSA偶聯(lián)抗原 化合物與雞卵蛋白OVA偶聯(lián)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 與血藍(lán)蛋白KLH偶聯(lián)抗原
Anti-CDK4 周期素依賴性激酶4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh OLFM1 嗅球蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
TNFRSF1B Kit Mouse 小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B ELISA配對(duì)抗體 ELISA
TSLP 英文名稱: 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素-1抗體 0.1ml
Cyclophilin B 英文名稱: 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIB抗體 0.2ml
Anti-CDK4 周期素依賴性激酶4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
豚鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒,英文名:NO ELISA Kit大鼠阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1α(SCNN1α)ELISA試劑盒,英文名:SCNN1α ELISA Kit豚鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒,英文名:IgA ELISA KiISA Kit for Human Argininosuccinate synthase小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒,英文名:IGFBP-1 ELISA KiISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 17小鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒,英文名:MPO ELISA KiISA Kit for Human Myc box-dependent-interacting protein 1小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒,英文名:PI3K ELISA KiISA Kit for Human NADH-cytochrome b5 reductase 2小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)ELISA試劑盒,英文名:Nrf2 ELISA Kit
ELISA Kit for Human Apolipoprotein A-I-binding protein小鼠乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(CHAT)ELISA試劑盒,英文名:CHAT ELISA KiISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 7小鼠表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)ELISA試劑盒,英文名:EGFR ELISA KiISA Kit for Human Carbonic anhydrase 2小鼠E3泛素蛋白連接酶TRIM68(TRIM68)ELISA試劑盒,英文名:TRIM68 ELISA KiISA Kit for Deoxypyridinoline小鼠10kDa干擾素γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10)ELISA試劑盒,英文名:IP-10 ELISA KiISA Kit for Endotoxin小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR1)ELISA試劑盒,英文名:VEGFR1 ELISA KiISA Kit for Human Fibroblast growth factor 8小鼠腎足蛋白(NPHN)ELISA試劑盒,英文名:NPHN ELISA Kit人雙重特異性促分裂原活化蛋白激酶激酶1(MAP kinase kinase 1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒,英文名:CTLA-4/CD152 ELISA Kit
豬IgG干粉 10mg/50mg/100mg 國(guó)產(chǎn)
WFDC5 英文名稱: P53應(yīng)答基因蛋白5抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CDK9 (Thr29) 磷酸化周期素依賴性激酶9抗體 規(guī)格 0.1ml
IL-17(Interleukin-17) 白介素-17抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DLG5 英文名稱: 胎盤和前列腺相關(guān)蛋白DLG5抗體 0.1ml
Anti-ACTH (1-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
CR(Mouse Calretinin) ELISA Kit 小鼠鈣結(jié)合蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CCL13/MCP-4/FITC 熒光素標(biāo)記單核細(xì)胞趨化蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EFHC1 EFHC1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
(EGFR)ELISA Kit 大鼠表皮生長(zhǎng)因子受體 96T
MAdCAM1 英文名稱: 粘膜細(xì)胞粘附分子1抗體 0.1ml
phospho-ATM (Ser794) 英文名稱: 磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體 0.1ml
Anti-CCL13/MCP-4/FITC 熒光素標(biāo)記單核細(xì)胞趨化蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml