PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:豬勞森氏胞內(nèi)菌(LI)核酸檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
相關(guān)產(chǎn)品:
波氏奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ostertagia podjapolskyiPCR
波氏桿菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Bordetella spp.PCR
伯克氏菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Burkholderia spp.PCR
伯氏立克次氏體柯克斯體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Coxiella burnetii ()PCR
實驗過程:
一、試劑準備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
小鼠糖類抗原125(CA125)ELISA試劑盒 ,英文名: CA125 ELISA Kit
小鼠瘦素(LEP)ELISA檢測試劑盒MouseLeptin,LEPELISAkit 96T/48T
人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)免疫試劑盒 Human Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA Kit
RatFractalkine/CX3CL1ELISAKit大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
AKT蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次
MouseGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISA試劑盒小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-Insulin/HRP 辣根過氧化物酶標記胰島素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit IgG 兔IgG(親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 10mg
高遷移率族蛋白A1抗體 Anti-HMGA1 0.2ml
Mouse Anti-Goat IgG 小鼠抗羊IgG 1mg
FIS1 英文名稱: 線粒體裂變1蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Ret (Tyr905) 0酸化指狀蛋白RET抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit IgG 兔IgG(親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 10mg
豬勞森氏胞內(nèi)菌(LI)核酸檢測試劑盒大鼠載脂蛋白H(APOH)ELISA試劑盒 ,英文名: APOH ELISA Kit
Mouse lymphocyte factor ELISA Kit 小鼠淋巴細胞因子ELISA試劑盒
MouseIerleukin5,IL-5ELISAKIT 小鼠白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforhumanfrizzledhomolog8,FZD8ELISAKit人卷曲蛋白8規(guī)格:48T/96T
細胞/組織白蛋白載玻片制備試劑盒20次
ELISAKitTIMP-2大鼠基質(zhì)金屬抑制因子2規(guī)格:48T/96T
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍