化工儀器網
詳細介紹
使用方法
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱 | 分類 | 規格 |
馬源性成分(Horse)核酸檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設置一個探針，在探針的兩端分別帶上發光集團和淬滅集團，這個時候，兩個平衡不發光，但是當DNA通過引物合成的時候，探針被折斷，釋放出發光集團和淬滅集團，兩個距離較遠，發光集團產生熒光，被機器收集到信號，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結合，當PCR擴增的時候，染料結合到DNA上，從而發光，單個的染料不發光，這樣就能收集到信號，我們可以看出，染料法特異性不強，只要是雙鏈的DNA都回結合發光。 | 在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增，且不會影響擴增產量和效率。快速循環條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個結合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3，卻能維持較高的擴增效率。此外，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾，則可將它們合并為一步，以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定，是在同一PCR反應管中同時加上多種病原微生物的特異性引物，進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關產品：
雷斯頓埃博拉病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Reston Ebola Virus PCR
類天花病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Alastrim VirusPCR
類圓線蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Strongyloides spp.PCR
類志賀鄰單胞菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Plesiomonas shigelloidesPCR
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠生長激素(GH)ELISA試劑盒 ，英文名： GH ELISA Kit
小鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA檢測試劑盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISAKit 96T/48T
人高爾基蛋白73(GP-73)免疫試劑盒 Human GP-73 ELISA Kit
RatHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒規格：96T/48T
BJ5183電轉感受態細菌5X100微升
Mouseierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISA試劑盒小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒規格：96T/48T
Anti-PCNA/FITC 熒光素標記增殖細胞核抗原抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml
Mouse Anti-rat IgG/FITC 熒光素標記小鼠抗大鼠IgGMulti-class antibodies規格： 0.3ml
DNA裂解因子抗體 Anti-DFF-45/ICAD 1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE PE標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
FbxL12 英文名稱： FBXL12蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-TrkA (Ser791) 0酸化酪A抗體 規格 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/FITC 熒光素標記小鼠抗大鼠IgGMulti-class antibodies規格： 0.3ml
馬源性成分(Horse)核酸檢測試劑盒大鼠髓鞘關聯糖蛋白(MAG)ELISA試劑盒 ，英文名： MAG ELISA Kit
Mouse glycogen phosphorylase II (GP-II) ELISA Kit 小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒
raesistinELISAKit 大鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHIT(Humanheparinassociatedaibody)ELISAKit人抗肝素PF4復合物抗體/HIT抗體規格：48T/96T
細胞RCT活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKit5-大鼠5核苷酸酶規格：48T/96T
化工儀器網