培養(yǎng)及打管說明:
1、安瓿瓶開封:用浸過75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng):用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng):菌種活化前,請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
儀器設(shè)備與器具:
1 恒溫培養(yǎng)箱:36±1℃。
2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
3 接種針。
4 顯微鏡。
5 超凈工作臺。
6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
7 天平:感量0.01g。
8 滅菌釜。
9 培養(yǎng)皿(直徑為90mm)、試管,經(jīng)121℃、30分鐘滅菌。
10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片
基本概念:
(1)菌群:由多種細(xì)菌混合組成的相對穩(wěn)定的細(xì)菌群體,具有某些共同性狀。如大腸菌群包括大腸桿菌、產(chǎn)氣腸細(xì)菌及他們之間的過渡類型。
(2) 菌屬:菌種的上一級分類,通常性狀相近、親緣關(guān)系密切的若干菌種組成一個菌屬,如芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、乳桿菌屬等。
(3)是細(xì)菌最基本的分類單位,通常指表型特征相似、親緣關(guān)系接近的一類細(xì)菌群體,與同屬內(nèi)其他種有著明顯差異;當(dāng)涉及到細(xì)菌保存時(shí),菌種是指細(xì)菌的種子(用來長期保存)資源。
(4) 菌型:同一菌種的不同細(xì)菌,在某些方面存在較小差異的為同一菌型,通常一個菌種內(nèi)的細(xì)菌可以分為多種不同的菌型。
(5) 菌株:由一個獨(dú)立分離的單細(xì)胞系培養(yǎng)而成的純遺傳型群體及其一切后代,一種微生物的每一個不同來源的純培養(yǎng)物均可稱為該菌種的一個菌株。
操作步驟如下:
1 液體石蠟的準(zhǔn)備 選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟,將液體石蠟分裝加塞,用牛皮紙包好,采用以下兩種方式進(jìn)行滅菌:121℃濕熱滅菌30min,置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分,經(jīng)無菌檢查后備用。160℃干熱滅菌2個小時(shí),冷卻后,經(jīng)無菌檢查后備用。
2 斜面培養(yǎng)物的制備 參照定期移植法。
3 灌注石蠟 將無菌的液體石蠟在無菌條件*入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部1cm左右,使菌體與空氣隔絕。
4 保藏 4.1 注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫(4~6℃)干燥處保藏,保藏時(shí)間2~10年。 4.2 保藏期間應(yīng)定期檢查,如培養(yǎng)基露出液面,應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充無菌的液體石蠟。
5 恢復(fù)培養(yǎng) 恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上,生長繁殖后,再重新轉(zhuǎn)接一次。
Rabbit anti-MG IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.5ml
CHDH/Choline dehydrogenase 脫抗體 規(guī)格: 0.2ml
CABLES2 細(xì)胞周期依賴性激CABLES2抗體 規(guī)格: 0.2mlGentamicin 慶大霉抗體 規(guī)格: 0.2ml
C12ORF4 12號染色體開放閱讀框4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.5ml
Claudin 3 緊密連接3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-CEBP beta (Ser105) 磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體 規(guī)格: 0.1mlC12ORF68 12號染色體開放閱讀框68抗體 規(guī)格: 0.2ml
PDSS2 抑DLP1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgM/FITC FITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3ml
CD8 alpha CD8抗體 0.1mlBAI1 腦特異性管生成抑制1抗體 規(guī)格: 0.2ml
OPCML 樣物質(zhì)結(jié)合/細(xì)胞粘附分子樣抗體 規(guī)格: 0.1ml
舒氏氣單胞菌規(guī)格DRAK2 DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.2mlUBR7/C14orf130 14號染色體開放閱讀框130抗體 規(guī)格: 0.2ml
BLNK B淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Paxillin(Tyr88) 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1mlIL-2 白介素2抗體(大、小鼠) 規(guī)格: 0.2ml
Bak Bcl-2同源拮抗劑抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Desmoglein 3/DSG3 橋粒芯蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml
c-Maf 原基因cMAF抗體 規(guī)格: 0.2mlV5 tag V5 tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-CHK2 (ser19) 磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激2抗體 規(guī)格: 0.1mlSERPING1/C1 Inactivator 酯抑制蛋白C1IN抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) 磷酸化β抑制蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlTBX18 轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體 規(guī)格: 0.2ml
CCDC47 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-NPM (Ser4) 磷酸化核仁磷酸蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
LATS1 瘤抑制基因LATS1抗體 規(guī)格: 0.2mlHCG Beta(4H7) 促性β亞基單抗 規(guī)格: 0.1ml
PAX9 配對盒基因9抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/AP 堿性磷酸(AP)標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
RFPL4B/RNF211 環(huán)指蛋白211抗體 規(guī)格: 0.2mlANKRD13B 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體 規(guī)格: 0.2ml
TNMD/tenomodulin 腱調(diào)蛋白抗體(軟骨調(diào)節(jié)素樣1蛋白) 規(guī)格: 0.2mlCDKN2A/p19ARF p19ARF抑基因抗體 規(guī)格: 0.1ml