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亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)重組蛋白

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更新時(shí)間:2023-04-10 16:08:19瀏覽次數(shù):304

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 說(shuō)明書
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 用于科研
英文名稱 Recombinant Leucyl/Cystinyl Aminopeptidase (L 物種 Homo sapiens (Human,人)
來(lái)源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品:CPB1重組人 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)重組蛋白 Recombinant Intelectin 1 (ITLN1)
CCL13重組人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ALCAM Protein Human 重組人

詳細(xì)介紹

相關(guān)產(chǎn)品:

內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)重組蛋白 Recombinant Intelectin 1 (ITLN1)

ALCAM Protein Human 重組人 ALCAM / CD166 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CPB1重組人 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CCL13重組人

僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

物種

性狀

來(lái)源

亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)重組蛋白

Homo sapiens (Human,人)

凍干粉

原核表達(dá)

英文名稱:Recombinant Leucyl/Cystinyl Aminopeptidase (LNPEP)

CAP; PLAP; OTASE; IRAP; Oxytocinase; Insulin-regulated membrane aminopeptidase; Insulin-responsive aminopeptidase; Placental leucine aminopeptidase

酶與激酶

物種:Homo sapiens (Human,人)

來(lái)源:原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位::細(xì)胞膜, 分泌

預(yù)測(cè)分子量:24.5kDa

實(shí)際分子量:28kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)

片段與標(biāo)簽:Leu782~Leu1025 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% TrehaloseProclin300

性狀:凍干粉

純度:> 95%

等電點(diǎn):8.9

應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

1.png

標(biāo)簽選擇:

親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHOHEK293

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試,條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAEWB

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測(cè)和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

  誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。

操作步驟 :

根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGEWestern blotting 和免疫沉淀等操作。

卡氏枝孢霉PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Cladosporium carrioniiPCR 50T

巨細(xì)胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Cytomegalovirus(CMV)PCR 50T

錦鯉皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Koi Herpesvirus(KHV)PCR 50T

解沒(méi)食子酸鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Streptococcus gallolyticusPCR 50T

MYSM1(Myb-like, SWIRM and MPN domain-containing protein 1) MYSM1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

Anti-beta Adaptin/AP2 銜接蛋白β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-BAD(Ser75) 0酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 規(guī)格 0.1ml

兔抗山羊 IgG(H+L)/TRITC 0.1ml 紅色熒光,Jackson公司分裝

VAV1 英文名稱: 鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 0.2ml

Dematin 英文名稱: 金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1抗體 0.1ml

Anti-beta Adaptin/AP2 銜接蛋白β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)重組蛋白潰瘍分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Mycobacterium ulceransPCR

潰瘍棒桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Corynebacterium ulceransPCR

潰蝕齒密PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Treponema phagedenisPCR

狂犬病病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Rabies VirusRTPCR

注意事項(xiàng):  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間。

2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò) 24 小時(shí)。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作


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