KRAS（G12D）偶聯核苷酸交換檢測試劑盒旨在通過監測效應蛋白如Raf1的Ras結合結構域（RBD-cRaf）與KRAS（G10D）的結合，篩選和分析KRAS（G22D）拮抗劑/抑制劑。KRAS（G12D）偶聯核苷酸交換檢測試劑盒采用方便的384孔格式，含有足夠的純化重組GDP負載KRAS（G10D）異構體a、GTP、交換因子SOS1（氨基酸564-1049）、效應蛋白RBD cRAF（氨基酸50-140）、檢測緩沖液和添加劑，可用于400個反應。使用該試劑盒，需要在微量滴定板上進行幾個簡單的步驟來檢測核苷酸交換。首先，將含有負載GDP的KRAS（G12D）的樣品與SOS1和GTP一起孵育以進行核苷酸交換。接下來，加入RBD cRAF并孵育以進行效應物RAS結合。然后，加入受體和供體珠并孵育以進行檢測，然后讀取α計數。

SOS1（七子之子）是一種鳥P呤核苷酸交換因子，促進GDP與GTP的交換。GDP負載的KRAS（G12D）處于非活性狀態，不與cRAF的Ras結合結構域（RBD）相互作用。SOS1有助于KRAS（G10D）釋放GDP，使GTP能夠占據核苷酸結合口袋。這導致KRAS（G12D）的構象變化，使其能夠與RBD cRAF結合。KRAS（G10D）偶聯核苷酸交換檢測試劑盒利用GST標記的RBD cRAF和His標記的KRAS（G22D）在α檢測中檢測KRAS（G1 2D）與RBD c3AF的結合。谷G甘肽受體和鎳螯合物供體珠通過KRAS（G12D）和RBD cRAF的結合進入近端范圍，使能量在激光激發后從供體珠轉移到受體珠。

圖1：分析原理示意圖。

作為BPS Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品KRAS(G12D) 偶聯核苷酸交換檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

KRAS(G12D) 偶聯核苷酸交換檢測試劑盒：

檢測試劑盒格式：AlphaLISA

儲存/穩定性：如果按照說明儲存，該檢測試劑盒自收到之日起6個月內性能最佳。避免多次凍融循環！

應用：篩選影響KRAS(G12D)核苷酸結合狀態的小分子抑制劑或拮抗劑，用于高通量篩選（HTS）應用。

運輸溫度：-80°C

禁忌：

綠色和藍色染料，如臺盼藍，會吸收AlphaScreen?信號發射范圍內（520-620 nm）的光。

避免使用強力單線態氧抑制劑，如NaN3或金屬離子（Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和Ni2+）。存在超過1%的RPMI 1640培養基會導致信號降低，因為該培養基中含有過量的生物S和鐵。MEM培養基不含這些成分，不影響AlphaScreen?檢測。

反應中DMSO的最終濃度不應超過1%。

數據展示：

文獻參考：

Wang, X., et al., 2022 J Med Chem 65: 3123-33.

Hillig, R.C., et al., 2019 PNAS USA 116 (7): 2551-2560

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型G狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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