澳洲胎牛血清提起血清融化,大家首先想到的方法就是4℃過夜法。
但由于血清融化過程中,蛋白比水先化,大量先化的蛋白和少量的水,靜靜地沉積在瓶子的底部,很容易導致一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產生沉淀的重要原因之一。
澳洲胎牛血清使用:
在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動,使血清混勻,但不要產生泡沫!
澳洲胎牛血清不推薦熱滅活。
1,事實上,這種沉淀表明我們的血清是高質量的,因為“生鮮冷凍沉淀”依然保留著。
2,這種冷卻的生鮮沉淀僅在人類或者其它哺乳運物的血清中和等離子當中存在,是經過迅速的無污染處理后,也對維護其蛋白或阻止污染的情況下,所謂的凝血因子VIII,凝血的血液或血清解凍時,才會產生這樣的白色沉淀纖維(纖維蛋白原)。
3,很多中方人員習慣于使用經過很多天反復凍融之后再處理,或者經過濾心過濾的血清才會說是污染的,實際上經過多次反復凍融處理的并經濾心過濾的血清已經失去了凝血因子VIII的作用了。
4,經過多次反復冰融及濾心過濾的血清實際上已經變得平庸了,變得失去了一些蛋白質,從而降低了促進細胞生長的素質或能力了。
5,當解凍血清使用時如果不再出現沉淀的話,是一個壞的征兆。
血清的顏色受多種因素影響,不用批次的血清的顏色很有可能有較大差異。顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。血清的顏色與產品的品質沒有直接的關系。
1、保存澳洲胎牛血清好的方法
血清應該保存在-15℃至-25℃。因為多數狀況下,一瓶500毫升的血清不能夠一次使用完畢,所以建議一次性將血清分裝成一次性能夠能夠試用完畢的體積(如50毫升)。若存放于4℃時,不建議超過一個月。
2、如何解凍血清才不會使產品質量受損?
我們建議血清在2-8℃的冰箱過夜融解。融解過程中規則地輕微地搖晃能夠保證化凍的均勻,防止出現沉淀。
3、血清解凍后發現有絮狀物出現,該如何處理?
血清中絮狀物的出現有許多種原因,常見的原因是血清中脂蛋白的變性;血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,也是造成絮狀物的主要原因之一。這些絮狀物的產生不會影響血清本身的質量。血清是否出現沉淀與血清的質量沒有關系。沉淀物的形狀受多種因素影響,常見的是絮狀或晶體/片狀。
如果使用移液管能夠避開沉淀物,則無需進行任何處理,使用移液管將血清加入培養基中。如果希望去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g離心力短暫離心,再將離心后的上清液加入培養基內一起過濾。不建議使用過濾的方式去除絮狀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
4、為什么儲存在冰箱中的澳洲胎牛血清會出現沉淀?
澳洲胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁物。這些沉淀的產生不會影響血清的質量。
5、如何避免血清中沉淀物的產生?
解凍血清時,請按照上述逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)。不建議直接將血清放在37℃水浴里解凍。溫度的變化過快會導致沉淀物和黑點的產生。
解凍血清時,請隨時輕輕地將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,影響血清的質量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,無需做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃、30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。