hRMECS人視網膜微血管內皮細胞

【細胞縮寫】    hRMECs細胞

    【細胞名稱】    hRMECs(人視網膜微血管內皮細胞)

    【背景資料】    見細胞說明書

    【細胞消化時注意把握消化時間，消化不夠會導致吹打細胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘，但以鏡檢時大部分細胞縮回球形為準，一般2次即可將細胞吹打下來，消化不夠進行細胞吹打易損傷細胞。細胞系的凍存液配方：90%FBS+10%DMSO，貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

    【代次】    P4

    【規格】    復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

    【細胞數】    1*10（6）

    【生物安全級別】    1

    【生物體】    人

    【組織來源】    視網膜

    【細胞形態】    詳見細胞說明書部分

    【細胞特性】    貼壁

    【特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養，建議添加雙抗培養，貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養，如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    【細胞】    細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

    【培養條件】    詳見細胞說明書

    【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    【凍存條件】    詳見細胞說明書

    【主要文獻】    請具體查閱相關發表文章

hRMECS人視網膜微血管內皮細胞
貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養觀察。同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基，培養觀察
3.若出現生長不均：貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養

貼壁細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養
4.注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存