您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
7
新型二代羊水培養(yǎng)基的檢驗方法
新型二代羊水培養(yǎng)基的檢驗方法：
采用如下方法做羊水細胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細胞：
1、取羊水20ml， 以120xg離心十分鐘。
2、在無菌操作臺操作，棄上清液。
3、加入2ml羊水培養(yǎng)基，輕輕 混勻，制成細胞懸液。
4、取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標記（包括編號、姓名、日期等）。
5、滴加0.5ml細胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片（25px2）中央，用移液管尖小心攤開。注意液體不能流出蓋玻片。
6、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
7、24小時后，給每塊蓋玻片補加1.5ml培養(yǎng)基。
8、接種7天后觀察細胞。當發(fā)現(xiàn)蓋玻片上細胞克隆數(shù)大于10個，每個克隆細胞數(shù)大于300且克隆邊沿細胞呈旺盛分裂狀態(tài)時，即可收獲細胞。否則，繼續(xù)培養(yǎng)1~2天。當克隆邊沿細胞融合度大于90%，呈現(xiàn)停止分裂狀態(tài)時，意味細胞已經(jīng)老化，不適合用作分析。
9、適合收獲的細胞按常規(guī)方法使細胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細胞片，經(jīng)吉姆薩染色處理后做染色體核型分析。
采用如下方法做羊水細胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細胞：
1、取羊水20ml， 以120xg離心十分鐘。
2、在無菌操作臺操作，棄上清液。
3、加入2ml羊水培養(yǎng)基，輕輕 混勻，制成細胞懸液。
4、取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標記（包括編號、姓名、日期等）。
5、滴加0.5ml細胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片（25px2）中央，用移液管尖小心攤開。注意液體不能流出蓋玻片。
6、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
7、24小時后，給每塊蓋玻片補加1.5ml培養(yǎng)基。
8、接種7天后觀察細胞。當發(fā)現(xiàn)蓋玻片上細胞克隆數(shù)大于10個，每個克隆細胞數(shù)大于300且克隆邊沿細胞呈旺盛分裂狀態(tài)時，即可收獲細胞。否則，繼續(xù)培養(yǎng)1~2天。當克隆邊沿細胞融合度大于90%，呈現(xiàn)停止分裂狀態(tài)時，意味細胞已經(jīng)老化，不適合用作分析。
9、適合收獲的細胞按常規(guī)方法使細胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細胞片，經(jīng)吉姆薩染色處理后做染色體核型分析。
