人黑色素瘤貼壁細胞如何培養
1、從手術室無菌取腦髓灰質或白質后,仔細剝除腦膜、血管和纖維成分,置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置于30—50倍體積的Hanks液中,此時腦組織比較柔軟,反復吹打即制成細胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細胞或細胞團快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養液,通過紗網成紗布過濾,計數并調整細胞密度。
5、接入培養瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養。適應環境過程較長,接種后貼壁較慢。貼壁后短期內也可能不見細胞分裂現象,然而一旦生長后即能迅速進入旺盛的增殖狀態。細胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。