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產品簡介
詳細介紹
李斯特菌檢測板原理及適用范圍
是一種預先制備好的一次性培養基產品,含有標準的營養培養基,選擇性試劑,冷水可溶性吸水凝膠和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯色底物( X-GLU ),適用于檢測或者計數食品及環境樣品中的李斯特菌菌數。檢測的李斯特菌包括單核細胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes),英諾克李斯特菌(Listeria.innocua),威氏李斯特菌(Listeria.welshi),但不能區分各種菌。
李斯特菌檢測板操作方法
2.1 食品樣品檢測
2.1.1 食品樣品處理:取樣品25 g(mL)放入裝有225mL滅菌磷酸鹽緩沖液(或生理鹽水)的取樣罐或均質袋內,制成1:10的樣品勻液。根據樣品污染程度及檢驗需要,可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液,選擇2~3 個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)來進行接種。
2.2 環境樣品檢測
2.2.1 環境樣品采集:用無菌的涂抹棒或其他采樣設備收集環境樣品。濕潤采樣設備液體體積≤10mL。濕潤劑可以為無菌水,滅菌生理鹽水(磷酸鹽緩沖液)或者緩沖蛋白胨水。
2.2.2 環境樣品處理:在收集的環境樣品中添加10mL 滅菌生理鹽水(或磷酸鹽緩沖液),充分混勻。根據樣品污染程度及檢驗需要,可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液,選擇2~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)來進行接種。
2.3 接種:將檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開,用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液均勻滴加到紙片上,迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板,靜置10s左右,待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復。
2.4 培養:將檢測板疊在一起,倒置于36℃±1℃恒溫培養箱內,培養18~24h
3、結果判讀
在檢測板上生長的藍綠色點即為李斯特菌陽性點,若檢測板上無菌生長或者長出點為其他顏色點即為李斯特菌陰性。
計數原則及報告方式
4.1 樣品計數
4.1.1 以生長有30~300CFU的檢測板為計數適宜范圍。
4.1.2 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在計數合適范圍30~300CFU之間,則計算兩個檢測板菌落數的平均值,再乘以相應的稀釋倍數,作為每克(毫升)中菌落總數結果。
4.1.3 若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內時,按式(1)計算:
∑C
N= ———————— •••••••••••••••••••(1)
(n1+0.1n2)d
式中:
N——樣品中李斯特菌菌落數;
∑C——兩個連續稀釋度檢測板(含適宜范圍菌落數的檢測板)李斯特菌落數之和;
n1——適宜范圍菌落數的*個稀釋度(低)檢測板個數;
n2——適宜范圍菌落數的第二個稀釋度(高)檢測板個數;
d——*稀釋度的稀釋倍數
示例:
結果表述為2.5×103CFU/g(mL)。
4.1.4 若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長,則以小于1/d(d—zui低稀釋倍數)計算。
4.1.5 低數值的估算:如果實驗樣品原液(水及液體飲料)或初始稀釋懸液(其他樣品)的兩個檢測板上的菌落數均小于30CFU,計算兩個檢測板上的菌落數的平均數。計算式(2):
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••(2)
nd
式中:
NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值;
∑C——兩個檢測板上菌落數的和;
n——檢測板的數量;
d——樣品初始懸液或實際接種懸液的稀釋倍數。
4.1.6 大數值的估算:若所有稀釋度的檢測板上菌落數均大于300CFU,計數zui接近300CFU的檢測板上的菌落并計算出平均數,其他檢測板可記錄為多不可計。結果計算式(3):
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••(3)
nd
式中:
NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值;
∑C——兩個檢測板上菌落數之和;
n——檢測板的數量;
d——與樣品懸液相*的稀釋倍數。