儲運條件
-20℃
產品組成
All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑
產品簡介
All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、減少污染的高質量一鏈cDNA 合成試劑盒，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分，僅需加入RNA 模板和水即可開始反應。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升級后的一鏈cDNA 合成試劑盒，15 分鐘內最長可獲得12 kb cDNA，產物可用于qPCR、普通PCR 等實驗。從組織或細胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染，如果反轉錄前不做去除處理，下游進行qPCR 反應時基因組DNA 與cDNA會同時進行擴增，尤其是引物設計在同一外顯子上時，影響定量準確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA，并且具有熱敏感性，在逆轉錄反應溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比，dsDNase 無需額外加入EDTA 進行失活，不僅節省實驗時間，而且降低了對逆轉錄反應的抑制。可依據基因組DNA 污染嚴重程度，選擇去基因組DNA 污染與反轉錄分開進行，或者去基因組DNA 污染與反轉錄一步進行的操作方法。
使用方法
針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）
All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑
① 于冰上配制如下反應體系：
a. 推薦使用試劑盒提取的高質量RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；
④ 55℃溫育15 min；
⑤ 反應結束后，85℃溫育2 min 以終止反應；
⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上，用于后續實驗；或立即保存于-20℃。
針對基因組DNA 含量高RNA 樣品
1. 基因組DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應體系：
a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；
注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴重，可適當延長37℃溫育時間至5 min。
④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活，然后置于冰上。
2. 第一鏈cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應體系：
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 50℃溫育15 min；
注：若目標RNA 不含Poly(A) 結構，可預先25℃溫育10 min。
④ 反應結束后，85℃溫育2 min，以終止反應；
⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上，用于后續實驗。
注：cDNA 溶液置于-20℃儲存，建議不超過1 周；置于-80℃可長期儲存。
注意事項
預混液中已經包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物，不僅適用于包含Poly(A) 結構的真核生物mRNA，也適用于不含Poly(A) 結構的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板，但不適用于miRNA 等小RNA 模板。
美國Azaood公司成立于2004年，是一家開發和生產用于生命科學研究、診斷和生物技術應用的高質量純化酶、蛋白質、核酸和細胞分離試劑盒、胎牛血清的；Azood公司是通過了ISO9001認證的主要制造商，可以滿足從研究到大規模批量生物加工和OEM應用與要求的公司。
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