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　　人乳腺癌細胞MDA-MB-231介紹

　　該細胞系由CailleauR在1976年從一名48歲的患有轉移性乳腺癌的白人女性的心包滲出液中分離建立的。該細胞表達FGF的受體。

　　細胞特性

　　（1）來源：乳腺癌

　　（2）形態：上皮細胞樣，貼壁生長

　　（3）含量：>1x106個/mL

　　（4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　（5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　人乳腺癌細胞MDA-MB-231運輸和保存

　　可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

　　（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

　　（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

　　（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。

　　MDA-MB-453人乳腺癌細胞/STR鑒定用途：僅供科研使用。

　　細胞接受后的處理：

　　（1）收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

　　（2）在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下，同時給細胞拍照各2-3張（10×，20×都要拍照），作為售后的依據。

　　（3）觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

　　（4）貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

　　（5）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基）。

　　（6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代。

　　細胞培養步驟

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　（1）準備L15（推薦iCell-0009）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

　　（2）培養條件：氣相：空氣，100%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　（3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　（1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　（2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3、按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4、將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

　　（3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

　　下面T25瓶為類；

　　1、細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

　　2、4min1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

　　3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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