目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞 非電擊>> DB3.1Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
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更新時(shí)間：2024-03-20 15:07:59瀏覽次數(shù)：175評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50支100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | ABG012-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
DB3.1 Chemically Competent Cell
基因型：
F- gyrA462 endA1 glnV44 (sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)ara14galK2lacY1proA2rpsL20(Smr) xyl5 Δleu mtl11
簡(jiǎn)要說(shuō)明：
DB3.1大腸桿菌菌株基因組中含有 gyrA462 基因，賦予其對(duì)ccdB毒性基因的抗性，特別適用于構(gòu)建或擴(kuò)繁含有ccdB基因的質(zhì)粒載體（例GATEWAY System vector) ，此菌株具有鏈MRI-素抗性。 High5TM系列DB3.1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。
操作說(shuō)明：
1.DB3.1感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA并用指尖輕輕打管底混勻(避免用槍吸打)，冰上靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無(wú)菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
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