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在瑞典1型糖尿病患者中評價RSR 3 Screen ICA™和2 Screen ICA™篩查試驗
閱讀：817 發布時間：2024-2-21胰島自身抗體是1型糖尿病(T1D)的特異性血清學標志物，是臨床醫生確定臨床分型、預測胰島素治療需求、識別有T1D風險的受試者的重要工具，也是觀察性研究(如(TEDDY)[9]、BABYDIAB[10]和TrialNet[11])的終點。TEDDY研究已證實胰島素自身抗體（IAA）是2歲以下新發T1D兒童相關性最高的抗體，而谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）更多見于2歲以上新發患者[9]。
用于自身抗體聯合測定的ELISA特別適用于人群篩選需求，只有在聯合檢測中結果為陽性的樣本才需要進一步檢測單項自身抗體，從而減少成本、時間、人力資源和環境影響。RSR公司的3 Screen ICA™用于谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗體IA-2 (IA-2A)和鋅轉運蛋白8 抗體(ZnT8A)的聯合檢測，2 Screen ICA™用于GADA和IA-2A的聯合檢測。這兩款產品均參與了糖尿病自身抗體標準化計劃(DASP)和國際自身抗體標準化計劃(IASP)組織的性能評估。
本研究的主要目的是評估3 Screen ICA™和2 Screen ICA™在瑞典人群樣本中的靈敏度和特異性，以期在未來進行篩查研究。此外，該研究還評估了IAA和ICA是否有助于提高靈敏度，以進行了RBA和ELISA法在GADA、IA-2A和ZnT8A檢測上的一致性評價。
材料和方法
1. 患者分組：
T1D組：納入100例瑞典T1D的患者，其中，93例患者在確診當天進行了血樣采集，3例患者在診斷后一天內進行了采樣，4例患者的T1D病程時間未知。在該研究組中，50例患者為15歲以下兒童(中位年齡8.8歲;范圍2.3 - 14.7;男/女: 27/23=1.17)，50例為青少年和成人(中位年齡16.5歲;范圍15.1 -41;男/女: 32/18 = 1.78)。
健康對照組：納入200名健康對照，包括100名兒童和100名成人。對照組兒童的中位年齡為12.6歲，范圍為11.9-13.6，男/女: 50/50=1.00；成人中位年齡42.5歲，范圍21 - 65，男/女：59/41=1.44。
2. 檢測方法
ELISA:酶聯免疫法；RBA：放射免疫法；IF：免疫熒光法
結果
RBAs、ICA-IF和ELISA的結果匯總見表1和表2。3 Screen的靈敏度為93%，特異度為97.5%；2 Screen的靈敏度為91%，特異度為98.5%。93例初篩陽性患者中，多數為多種自身抗體陽性，其中72%(67/93)同時為GADA和IA-2A陽性，57%(53/93)為三種自身抗體(GADA、IA-2A和ZnT8A)陽性。在T1D篩查陰性的7例中，僅有1例呈GADA ELISA單項檢測陽性。
在健康對照中，僅有1例(0.5%)存在多種自身抗體(IA-2A和ZnT8A)陽性。
在13例T1D患者和2名健康對照中IAA呈陽性。
表1 100例1型糖尿病患者的胰島β細胞特異性自身抗體結果
表2 200名健康對照的胰島β細胞特異性自身抗體結果。
IA-2A RBA的靈敏度為78%。GADA RBA的加入提高了12%靈敏度，將該方法學整體靈敏度提高至90%，而ZnT8A RBA (R/W/Q中的任何一種)的加入使靈敏度進一步提高到 91%。相比之下，添加IAA和ICA-IF結果并沒有比使用其他檢測方法獲得更高的靈敏度(表1)。
2 Screen和3 Screen兩種檢測方法最一致(Kappa=0.97)。IA-2A RBA和IA-2A ELISA兩種檢測方法的一致性最好(Kappa=0.96)。
討論
研究者采用了6種RBA、1種IF和5種ELISA對100名T1D患者和200名健康對照的胰島β細胞特異性自身抗體進行了檢測，結果發現3 Screen方法表現優異，其靈敏度(93%)和特異性(97.5%)最高。2 Screen和3 Screen的檢測靈敏度優于任何RBA。
相比于放免法，GADA ELISA擁有更高的檢出率(84% vs 77% GADA RBA)，大多數(76%)患者在兩種GADA檢測方法中均呈陽性，而8例患者僅通過ELISA檢測為GADA陽性，1例僅通過GADA RBA檢測為GADA陽性。
相比于放免法(61%)，ZnT8A ELISA (ZnT8R和ZnT8W變體)可在更多(75%)T1D患者中檢測出陽性。IA-2A ELISA和RBA鑒定出相同數量(78%)的陽性患者。
3 Screen適用于人群篩查。除免疫項目常用的血清樣本外，經Ca2+處理的EDTA血漿也可以得到可靠的結果[24,25]。在樣品中加入血紅蛋白、生物素、脂肪乳劑或膽紅素對結果沒有顯著影響，這表明該檢測不容易受到這些物質的干擾。
綜上所述，本研究顯示了3 Screen優異的性能，具有較高的檢測靈敏度和特異性，可用于健康人群中對三種自身抗體（GADA、IA-2A和ZnT8A）的初步篩查。在3 Screen篩查陽性的情況下，需進一步對抗體進行單項檢測，以識別具有進展為T1D高風險的多重自身抗體陽性患者。經3 Screen篩查試驗陰性的樣本通常不需要進一步檢測。此外，對兩歲以下兒童進行IAA檢測也是有必要的。因此，3 Screen + IAA的測試策略更適合非常年幼的兒童。
參考文獻：T?rn C, Vaziri-Sani F, Ramelius A, Elding Larsson H, Ivarsson SA, Amoroso M, Furmaniak J, Powell M, Smith BR. Evaluation of the RSR 3 screen ICA™ and 2 screen ICA™ as screening assays for type 1 diabetes in Sweden. Acta Diabetol. 2022 Jun;59(6):773-781.