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第三代促甲狀腺激素受體抗體檢測產品的性能評估
閱讀：1056 發布時間：2022-10-17
Graves病患者血清中，TSH受體自身抗體（TRAb）的病理作用已經明確。目前，檢測TSHR自身抗體有兩種方法。一種方法是基于類似TSH的自身抗體在細胞系中誘導第二信使cAMP的能力，稱為生物測定(bioassay)方法，該方法能夠根據其增強或抑制cAMP合成的生物活性來區分刺激性抗體（TSAb）和阻斷性抗體（TSBAb）。另一種方法是基于豬TSHR或人類重組TSHR的TRAb檢測，患者血清中的TRAb和牛TSH（用I-125或生物素標記）共同競爭TSHR上的結合位點。
Smith博士（RSR公司創始人）初次報道了一種測定血清TRAb的新方法[1]，其中，患者血清中的TRAb可與生物素標記的促甲狀腺激素受體人單克隆刺激型抗體M22[1]產生競爭，抑制M22與ELISA板孔上包被的TSHR的結合，以競爭抑制法構建酶聯免疫吸附試驗（ELISA）[2]。
本研究旨在比較兩代和三代TRAb檢測方法的性能差異，二代為抗體競爭抑制TSH，三代為抗體競爭抑制M22。此外，我們評估了三代TRAb檢測產品在鑒別未經治療的Graves病（GD）患者和無痛性甲狀腺炎（PT）患者上的應用前景。
研究對象
檢測方法
圖1展示了基于M22的測定（表述為第三代TRAb，以TRAb3rd表示）和基于抑制TSH-生物素的測定（表述為第二代TRAb測定，以TRAb2nd表示）的檢測原理。
圖1 二代和三代TRAb檢測原理。二代TRAb利用待測TRAb與TSH-生物素形成競爭抑制，抑制其與固相TSHR結合；三代TRAb利用待測TRAb與M22-生物素形成競爭抑制，抑制其與固相TSHR結合。
臨界值定義以及統計分析
研究分析了230名健康對照者的血清抗體，只有1名（0.43%）對M22結合值的抑制率大于臨界值15%（32.8%）。
從244例未經治療的GD患者中計算靈敏度（真陽性結果），并從三個對照組中計算特異性（真陰性結果）。二代TRAb檢測特異性*，靈敏度99.2%時，抑制率臨界值為22%。
為了確認三代TRAb產品的臨床臨界值，我們對244例未經治療的GD患者（疾病組）和三個不同對照組（下表）進行了檢測，并對檢測結果進行了ROC曲線分析。
第三代TRAb檢測在三組對照中的抑制率臨界值分別為14.5%（a）、22.0%（b）和22.0%（c），靈敏度均為99.6%，特異性分別為99.6%（a）、96.6%（b）和97.5%（c）（圖2）。
圖2 三代TRAb不同對照組間ROC曲線。a:疾病組+對照組1；b：疾病組+對照組2；c:疾病組+對照組3。
根據結果建議三代TRAb抑制率臨界值為15%。
二代和三代TRAb檢測對比
在15%的臨界值下，第三代TRAb對于新診斷GD、PT和SAT患者的血清樣本靈敏度和準確性與第二代相比如表1所示，數值分布如圖3所示。
圖3 二代與三代TRAb在不同患者組間檢測數值分布圖
注：a組為三代TRAb分別在GD、PT以及SAT三組間檢測值分布；b組為二代TRAb在三組間分布。
在244例未經治療的Graves病患者中，三代檢測與二代檢測結果高度相關（r=0.911），但三代檢測（243例，99.6%）的抗體陽性率高于二代檢測（242例，99.2%）。在對照組中，三代檢測在9.2%的PT組和6.7%的亞急性甲狀腺炎（SAT）組中檢出抗體；二代檢測在16.8%的PT組和13.3%的SAT組中檢出抗體。
表1 二代與三代TRAb在三個疾病組間陽性率的比較
綜合來看，三代TRAb在GD組檢出率更高，PT組和SAT組檢出率更低，整體性能更優。與二代檢測相比，三代檢測對GD和PT的診斷準確性顯著提高（p=0.0026）。
圖4 二代與三代TRAb間結果相關性比較。橫軸為三代TRAb，縱軸為二代TRAb。
討論
甲狀腺功能亢進的流行病學數據差異較大。在日本等碘攝入量高的國家及地區，大多數甲狀腺毒癥病例是由GD和PT引起的，而在碘攝入量低的地區，GD和毒性多結節性甲狀腺腫是甲狀腺功能亢進的常見原因[4]。在目前的臨床實踐中，需要在甲狀腺毒癥患者中檢測TRAb以鑒別GD患者。在本研究中，我們證實了基于M22-生物素競爭抑制的ELISA方法（三代TRAb）在診斷GD以及鑒別GD和PT引起的甲狀腺毒癥患者方面的高靈敏度。
我們的結果最終表明，在患有GD和PT的甲亢患者中，基于M22第三代TRAb檢測的準確性為96.7%，顯著優于第二代TRAb準確性為93.9%（p=0.0026）。尤其是在GD和PT患者的鑒別診斷上，三代檢測性能顯著優于二代。新方法的在預測停藥后GD的預后情況，以及自身抗體與Graves眼病的關系上的臨床價值有待進一步發掘。
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參考文獻：Kamijo K , Ishikawa K , Tanaka M . Clinical Evaluation of 3rd Generation Assay for Thyrotropin Receptor Antibodies : The M22-biotin-based ELISA Initiated by Smith[J]. Endcor J, 2005, 52.