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水通道蛋白4 抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作流程
閱讀：2080 發(fā)布時(shí)間：2018-8-30RSR AQP4Ab 抗體檢測(cè)試劑盒是世界上在該項(xiàng)目上同時(shí)獲得CE和美國FDA認(rèn)證的產(chǎn)品，F(xiàn)DA 510(K）注冊(cè)編號(hào)：K161951； 中國CFDA注冊(cè)受理號(hào)：JSZ1800016
1.檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：
(1)請(qǐng)確保試劑盒在使用前已在室溫環(huán)境下(20-25℃)回溫。
(2)核準(zhǔn)本次檢測(cè)涉及樣品數(shù)，規(guī)劃好板面布局。
(3)使用剪刀或其他物品打開試劑盒內(nèi)微孔板的鋁箔包裝，取出微孔板，將本次檢測(cè)不涉
及的多余板條卸除，妥善放回鋁箔包中。鋁箔包內(nèi)應(yīng)放置隨裝的干燥劑并以膠帶封好開口，裝回自封袋中隨試劑盒冷藏保存。
(4)對(duì)空白孔做好標(biāo)記。
(5)取出試劑盒內(nèi)的濃縮洗液(concentrated wash solution)，以純水十倍稀釋濃縮液。總量根
據(jù)樣品數(shù)決定，手工洗板一般用量為500mL/半板。
(6)準(zhǔn)備一塊ELISA 微孔板蓋或若干ELISA 板封口膜。
(7)觀察樣品性狀。新鮮血清或凍存血清應(yīng)在室溫下保持澄清，如發(fā)現(xiàn)渾濁或溶血請(qǐng)?jiān)?/span>
13000RPM 下離心5 分鐘，并在接下來的檢測(cè)中只使用澄清部分。
2.檢測(cè)流程
(1)取出試劑盒內(nèi)的AQP4-生物素(AQP4-biotin)和復(fù)溶緩沖液(reconstitution buffer)，每瓶凍
干粉使用移液器加入1.5ml 復(fù)溶緩沖液復(fù)溶。復(fù)溶瓶數(shù)根據(jù)本次檢測(cè)樣品量決定，每瓶生
物素可供50-55 孔使用，單次未使用完的已溶解生物素可在2-8℃中存放3 天。
(2)使用移液器向每孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品(Calibrator)，對(duì)照品(Negative control&Positive
control)以及患者血清50uL。加樣順序中建議標(biāo)準(zhǔn)品按照先陰性質(zhì)控品、后標(biāo)準(zhǔn)品由低到
高順序加樣。
(3)除空白孔外使用移液器向每孔中加入25ul 復(fù)溶的AQP4-生物素
(4)完成加樣后蓋好微孔板蓋，將微孔板放置于酶標(biāo)板水平搖床上，按500 次/分鐘頻率振
蕩總計(jì)兩小時(shí)。
(5)取出試劑盒內(nèi)的鏈霉親和素過氧化物酶(SA-POD)和稀釋液(diluent for SA-POD)，按
照每0.1mlSA-POD 需加1.9ml 稀釋液進(jìn)行二十倍稀釋。一般情況下完成整板檢測(cè)需用
0.6mlSA-POD 與11.4ml 稀釋液。推薦使用單獨(dú)容器盛放稀釋后的SA-POD，非特殊情況不
推薦在SA-POD 瓶內(nèi)直接稀釋。
(6)完成孵育后將微孔板取下，打開板蓋，采取快速翻轉(zhuǎn)的方式將孔內(nèi)液體拍凈。使用洗
瓶/多道移液器/洗板機(jī)抽取稀釋完成的洗液進(jìn)行洗板，每孔洗滌三次。完成后將微孔板倒
扣在吸水紙上拍打以除去多余洗液。若采用自動(dòng)洗板機(jī)則可設(shè)定抽取量1mL，加液量
300uL，振蕩3-5 秒，洗滌次數(shù)為3.
(7)除空白孔外每孔中加入稀釋好的SA-POD 100ul。蓋好板蓋室溫使用水平搖床500 次/分
振蕩20 分鐘。
(8)重復(fù)步驟6.如采用手工洗板，完成三次洗液洗板后追加一次純水洗板，用以除去泡沫。
(9)請(qǐng)注意:此步驟中包含空白孔。
使用移液器向每孔中加入100ul 顯色底物(TMB，棕色瓶)，在避光處放置20 分鐘，請(qǐng)勿
振蕩。
(10)此步驟中包含空白孔。使用移液器向每孔中加入100ul 終止液(stop solution)，可觀察
到顯藍(lán)色的微孔變?yōu)榱咙S。
(11)蓋好板蓋，使用水平搖床或手工振蕩微孔5 秒，保證微孔內(nèi)顯色過程充分停止。
3.讀數(shù)及數(shù)據(jù)處理
(1)讀數(shù)儀器的調(diào)整
檢測(cè)讀數(shù)需使用具有讀取特定波長的吸光度功能的儀器。推薦使用全波長酶標(biāo)儀或具備
450nm 及405nm 濾光片的酶標(biāo)儀；本實(shí)驗(yàn)推薦在檢測(cè)步驟9 時(shí)打開儀器預(yù)熱，以取得穩(wěn)
定的波長利于讀數(shù)。
(2)讀取吸光度
打開計(jì)算機(jī)，在控制軟件中打開已準(zhǔn)備好的讀板方案，在板面布局中按照本次檢測(cè)樣品數(shù)
目更改樣品布局。完成設(shè)定后點(diǎn)擊”Read”開始讀板。
(3)完成讀數(shù)后將結(jié)果按讀板方案中的報(bào)告單模板輸出至LIS 系統(tǒng)，打印報(bào)告單。
4.檢測(cè)后工作
(1)讀數(shù)完畢的微孔板應(yīng)小心拆下已使用的板條，請(qǐng)勿將孔內(nèi)液體濺出。將已使用的板條
按醫(yī)療廢物處理。
(2)空板架使用*或其他方式妥善清潔后保存，推薦放回試劑盒微孔板的自封袋內(nèi)。
(3)本次檢測(cè)未使用干凈的復(fù)溶生物素及稀釋的SA-POD 可留作下次檢測(cè)使用，隨試劑盒其
他成分一并冷藏(2-8℃)貯存。
(4)洗液及濃縮洗液推薦冷藏貯存。