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公司動態

ATCC菌種轉化的操作步驟

閱讀:389          發布時間:2017-11-15

ATCC菌種轉化操作步驟
(1)事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
(2)從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100μl)感受態菌,立即用手指加溫融化后插入冰上,冰浴5~10min。
(3) 加入5μl連接好的質粒混合液(DNA含量不超過100ng),輕輕震蕩后放置冰上20min。
(4) 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克,然后迅速放回冰中,靜置3~5min。
(5) 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養基(不含抗菌素)輕輕混勻,然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.
(6) 在超凈工作臺中取上述轉化混合液100~300μl,分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,待其冷卻后再涂)。
(7) 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話,滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,8μl 20% IPTG,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
(8) 在涂好的培養皿上做上標記,先放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養基里后,再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
(9)ATCC菌種在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫實驗報告。
(10)觀察平板上長出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
磺卞青霉素等的效價測定    Antibiotic Agar     抗生素1號培養基(PH6.5-6.6)    250克
磺胺類的無菌試驗用    PABA Medium(Bacteria)    PABA培養基(需氧、厭氧菌)    250克
環氧乙烷消毒和電離輻射消毒過程檢測指示菌(枯草桿菌黑色變種芽孢及短小桿菌芽孢)培養(GB標準)    0.5% Dextrose Broth Medium    0.5%葡萄糖肉湯培養基    250克
化妝品微生物檢測    TAT Broth    胰蛋白胨大豆卵磷脂聚山梨酸酯瓊脂    250克
化妝品檢驗中樣品制備、增菌    SCDLP Broth Medium    SCDLP液體培養基    250克
化妝品檢驗中細菌計數    Lecithin Tween 80 Nutrient Agar    卵磷脂吐溫80營養瓊脂    250克
弧菌的分離培養    MCPC Medium    MCPC培養基    250克
含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉    RPMI 1640    1640培養基    10升
含L-谷氨酰胺,不含NaHCO3    F-12 Nutrient Mixture    F-12營養混合物    10升
ATCC菌種

 

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