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ATCC菌種轉(zhuǎn)化子有大有小原因分析
閱讀：241 發(fā)布時間：2017-9-27本公司專業(yè)經(jīng)銷代理ATCC菌種，進(jìn)口試劑，近日，我司實驗室經(jīng)常接到客戶這樣的疑問，他們在測試大腸桿菌轉(zhuǎn)化子時，大腸桿菌轉(zhuǎn)化子有大有小，結(jié)果詭異，想咨詢一下具體原因。
這情況我遇到過，尤其菌液PCR時候，有的強有的弱，有的帶大小還不一樣。我沒有具體研究過啥愿意，但把大小一樣的那個送去測序，一般都是正確的。
關(guān)于你的這個情況，我分析【我自己的我也分析過】
1、可能酶產(chǎn)物碎了一些，這樣連進(jìn)去就有大有小。如果你引物用的是在載體上的，那很可能擴(kuò)出大小不同的。如果你引物就是在基因上的，這個好解決，你把退火溫度逐漸提高，看看是不是那個不同片段就沒了。
2、有的時候發(fā)生了片段自連【這個看起來好像很可笑，但其實我發(fā)現(xiàn)只要末端有一個堿基配對，時間長的話，片段是可以連接到一起的，這個就跟TA連接實際一樣】。
3、你的電泳系統(tǒng)有污染，你把別人的片段給收進(jìn)去了，這個我確實證實過，我一批克隆40個基因，我曾經(jīng)在別的克隆中挑出過另外的基因。
4、另一種可能，你T載體上連接的方向問題，如果酶切不*，可能同樣會造成不同大小片段，這些如果你量很多的話其實在跑電泳回收時候是分不開的，但PCR趕巧了，也許就正好擴(kuò)出來了【這種情況只限于載體上有你用的酶切位點，而你目的片段上恰恰引入了這連個酶，這個你可以試著畫個圖看看，把TA連接的正反畫畫】。
5、DH好像能長很大的，也沒關(guān)系的，我的有時候就很大點，其實不用放室溫，你冰箱4-8℃那層放置1個月，就看出來了。
6、所以我覺得這個問題也沒法糾結(jié)了。如果你覺得切割實在很難，ATCC菌種那干脆重新PCR從T載體上擴(kuò)出來【高保真擴(kuò)一般也不會突變，當(dāng)然TAKARA的primerstar除外】，帶上酶切位點，然后直接回收酶切連接就可以了，找到重組子后測序正確在表達(dá)就行了不是。
蕓香苷;蕓香葉苷;維生素P;蘆丁蕓香苷;蕓香甙 含量： 進(jìn)口/國產(chǎn) 蘆丁 20mg/支 英文名稱 Rutin 規(guī)格:
雷公藤內(nèi)酯醇;雷公藤多甙 含量： 進(jìn)口/國產(chǎn) 雷公藤甲素 20mg/支 英文名稱 Triptolide 規(guī)格:
雷公藤乙素;雷公藤羥內(nèi)酯;雷公藤內(nèi)酯二醇 含量： 進(jìn)口/國產(chǎn) 雷公藤乙素 20mg/支 英文名稱 Tripdiolide 規(guī)格:
南蛇藤素 含量： 進(jìn)口/國產(chǎn) 雷公藤紅素 20mg/支 英文名稱 Celastrol 規(guī)格:
雷公藤酯甲 含量： 進(jìn)口/國產(chǎn) 雷公藤內(nèi)酯甲 20mg/支 英文名稱 Wilforlide A 規(guī)格:
藤黃菌素 含量： 進(jìn)口/國產(chǎn) 木犀草素 20mg/支 英文名稱 Luteolin 規(guī)格:
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