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脊髓灰質(zhì)炎病毒1型PCR檢測試劑盒實驗原理
閱讀：111 發(fā)布時間：2021-4-30| 提 供 商 | 上海一研生物科技有限公司 | 資料大小 | 13.2KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 111次 |
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脊髓灰質(zhì)炎病毒1型PCR檢測試劑盒說明書
本產(chǎn)品是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
1. 方便，用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷，操作步驟已經(jīng)限度地簡化，能減少污染，降低實驗誤差。
3. 本產(chǎn)品A 型含電泳染料，PCR 反應(yīng)液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產(chǎn)物可直接用于T 載體克隆，不需要額外的加A 反應(yīng)。
使用及效果：將本產(chǎn)品15 μL 與用戶自備的模板，引物和水共15 μL 混合后，直接進行PCR反應(yīng)（PCR 參數(shù)由用戶自己確定），反應(yīng)結(jié)束后直接取10 μL 電泳檢查擴增結(jié)果。
技術(shù)特點：
1、準(zhǔn)確可靠，臨床雙盲對照試驗＞1000例，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測序法比對，結(jié)果一致性大于99%。
2、高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3、快速：整個檢測流程只需3小時。
4、簡便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑，使體系配置操作簡便。
5、防污染
6、高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補鏈結(jié)合必需*配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對，在延伸中產(chǎn)生熒光。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 專用反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。
準(zhǔn)備物品：
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
操作方法：
1產(chǎn)品名稱直接測定
2測定準(zhǔn)備
3背景對照測定
4樣品活性測定
5計算樣品活性
備注：
1．本產(chǎn)品為50次操作
2．操作時，須戴手套
3．操作時，避免污染母液
4．即刻進行熒光檢測分析
5．本產(chǎn)品染色劑不易洗掉，染色持久
6．本公司提供系列試劑產(chǎn)品
運輸及保存：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。