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大鼠核因子?b(NF?b)酶聯免疫分析ELISA試劑盒說明書

閱讀:168          發布時間:2018-9-28
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大鼠核因子?b(NF?b)酶聯免疫分析ELISA試劑盒實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠核因子?b 水平。用純化的大鼠核因子?b抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入核因子?b,再與HRP標記的核因子?b抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子?b呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠核因子?b (NF?b)的含量。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(1350ng/L)

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張 

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

大鼠核因子?b(NF?b)酶聯免疫分析ELISA試劑盒標本處理及要求

1.血清、血漿標本可直接測定;

2.尿液、腦脊液、腹腔液:2000-3000轉/分離心10分鐘后,取上清液待測。

3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;再各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后,在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉;再各取50μl分別加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃 度分別為 900 ng/L,600ng/L ,300 ng/L,150 ng/L,75 ng/L)。

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.  嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

6.本試劑不同批號組分不得混用。

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.底物請避光保存。

檢測范圍:

50 ng/L -1000 ng/L

規格:

96人份/盒

大鼠核因子?b(NF?b)酶聯免疫分析ELISA試劑盒保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

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