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小鼠elisa試劑盒競爭法的方法學評價

閱讀:399          發布時間:2018-8-14

    當小鼠elisa試劑盒競爭法開發以親和力大小比較為目的,往往會以IC50值評價待測樣品阻斷配體受體結合效果,IC50越小,待測樣品的阻斷效果越好。親和力競爭法開發的劑量曲線應該有明顯的上下平臺期以得到較為穩定的IC50值。生物學活性的方法學驗證可參照USP1032, 1033,1034來進行實驗方案的設計和數據分析。
   具體到elisa競爭法的方法學評價,即制備相對于對照品理論效價為156%,125%,100%,80%,64%的樣品進行檢測,通過比較對照品和樣品的IC50,得到樣品相對于實測效價,通過實測效價和理論效價的差異初步確認以親和力大小比較為目的的elisa競爭法的質量。承接上文的全曲線選擇合適的8個濃度點,進行初步的方法學驗證的結果如下圖所示:該單次實驗如果進行多人和關鍵試劑的多批次實驗,得到的實測效價經過統計學分析將構成方法學驗證中主要的幾個概念,精密度,準確度,線性和范圍。如結果顯示單次實驗結果實測效價和理論效價的差異在5%以內,能夠初步判斷該以親和力大小比較為目的elisa競爭法有較好的方法質量。
    當小鼠elisa試劑盒競爭法開發以定量為目的,選取7個點以理論濃度為X軸,信號值為Y軸進行四參數函數擬合得到標準曲線,將對照品的信號值重新代入標準曲線可得回測濃度值,多次實驗統計分析后回測濃度值和理論值的偏差決定了該條標準曲線的檢測上限,檢測下限,測量范圍,更加詳盡的方法學驗證可參照2015版中國藥典第三部9012 生物樣品定量分析方法驗證指導原則或者美國FDA版本的Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation相關論述。

 WNT12/WNT-10B 5-羥色胺受體2B抗體

 WNT2B 5-羥色胺受體2A抗體

 Wnt3a 5-羥色胺受體1B抗體

 WNT 5-羥色胺受體1A抗體

 WNT9A 5-羥色胺抗體

 WRCH-1 3-羥丁酸脫氫酶抗體

 WWOX 3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體

 X protein (middle) 3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內參抗體)

 X protein (N-Terminus) 3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內參抗體)
小鼠elisa試劑盒

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