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微生物菌種安瓿管或凍存管的準備

宜選用耐溫度驟變，耐壓，管壁厚度均一并且為中性玻璃的安瓿管，或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。清洗安瓿管時，先用2％鹽酸浸泡過夜，然后用自來水沖洗3次以上，zui后用蒸餾水沖洗、浸泡至pH中性，然后干燥。塑料凍存管用蒸餾水浸泡、沖洗干凈、干燥即可，然后在121％下高壓滅菌15—20min備用。

標簽的準備

使用標簽機在耐低溫標簽紙上打印菌種編號、保藏日期，大小為lcm×3cm左右，然后貼在安瓿管上。或采用非水溶性記號筆，記錄菌種編號、保藏日期。

保護劑的選擇與準備

保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度，一般采用10％一20％甘油。參見附錄B《常用保護劑》。

菌種的準備

微生物的生理狀態對液氮保藏的存活率有影響，一般采用對數生長期的中期或后期的培養物。菌種制備有多種方法，參見附錄c《菌種的準備》。

菌液分裝

菌液分裝參見4 6菌液分裝與加棉塞。若用安瓿管分裝菌液，在分裝完畢后應在距管口5cm左右用噴射火焰(噴燈、焊槍等)將其熔封，若用凍存管分裝的，應立即擰緊螺帽。

微生物菌種預凍

預凍時，冷凍速度一般控制在每分鐘下降1℃，zui后凍結溫度低于共晶點溫度10℃左右即可。

保藏

將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相溫度為一150℃，液相溫度為一196℃。

保藏周期

一般10年以上。

適用范圍

各類微生物。

液氮保藏應注意事項

·防止操作人被凍傷，操作時應注意安全，戴面罩及皮手套；

·若用塑料凍存管保藏，一定要擰緊螺帽；

·運送液氮時一定要用特制的容器，絕不可用一般密閉容器存放或運輸液氮，切勿使用保溫瓶存放液氮；

·微生物菌種存放液氮容器的室內要注意通風，防止過量氮氣使人窒息；

·防止安瓿管破裂爆炸。如液氮滲人安瓿管內，當從液氮容器中取出時，液態氮體積將膨脹約680倍，爆炸力很大，要特別小心；

·注意觀察液氮容器中液氮的殘存量，定期填充液氮。