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分析微生物菌種的液氮超低溫保藏法
閱讀：2255 發(fā)布時(shí)間：2017-6-20微生物菌種液氮超低溫保藏法簡(jiǎn)稱液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亞砜等作為保護(hù)劑，在液氮超低溫（-196℃）下保藏的方法。其主要原理是菌種細(xì)胞從常溫過渡到低溫，并在降到低溫之前，使細(xì)胞內(nèi)的自由水通過細(xì)胞膜外滲出來，以免膜內(nèi)因自由水凝結(jié)成冰晶而使細(xì)胞損傷。美國(guó)ATCC菌種保藏中心采用該法時(shí)，把菌懸液或帶菌絲的瓊脂塊經(jīng)控制致冷速度，以每分鐘下降1℃/min的速度從0℃直降到-35℃，然后保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中。如果降溫速度過快，由于細(xì)胞內(nèi)自由水來不及滲出胞外，形成冰晶就會(huì)損傷細(xì)胞。據(jù)研究認(rèn)為降溫的速度控制在（1～10）℃/min，細(xì)胞死亡率低；隨著速度加快，死亡率則相應(yīng)提高。
微生物菌種液氮低溫保藏的保護(hù)劑，一般是選擇甘油、二甲基亞砜、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊環(huán)、吐溫80等，但zui常用的是甘油（10%～20%）。不同微生物要選擇不同的保護(hù)劑，再通過試驗(yàn)加以確定保護(hù)劑的濃度，原則上是控制在不足以造成微生物致死的濃度。
此法操作簡(jiǎn)便、、保藏期一般可達(dá)到15年以上，是目前被*的zui有效的菌種長(zhǎng)期保藏技術(shù)之一。除了少數(shù)對(duì)低溫?fù)p傷敏感的微生物外，該法適用于各種微生物菌種的保藏，甚至連藻類、原生動(dòng)物、支原體等都能用此法獲得有效的保藏。此法的另一大優(yōu)點(diǎn)是可使用各種培養(yǎng)形式的微生物進(jìn)行保藏，無論是孢子或菌體、液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物均可采用該保藏法。其缺點(diǎn)是需購(gòu)置超低溫液氮設(shè)備，且液氮消耗較多，操作費(fèi)用較高。
要使用微生物菌種時(shí)，從液氮罐中取出安瓿瓶，并迅速放到35～40℃溫水中，使之冰凍熔化，以無菌操作打開安瓿瓶，移接到保藏前使用的同一種培養(yǎng)基斜面上進(jìn)行培養(yǎng)。從液氮罐中取出安瓿瓶時(shí)速度要快，一般不超過1min，以防其他安瓿瓶升溫而影響保藏質(zhì)量。并且取樣時(shí)一定要戴手套以防止意外爆炸和凍傷。