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詳細介紹
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：細胞凋亡檢測試劑盒IV(CY3)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：20T/100T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹：
保存條件：-20℃冰凍保存一年。 工作原理： 在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細胞的死亡，其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi) 源性核酸內(nèi)切酶被激活，細胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生 與 DNA 斷點數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 結(jié) 合在 DNA 斷點部位，可以通過生物標記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后，再結(jié)合 鏈酶親和素-熒光素 CY3(SABC-CY3)。Cy3 在 554nm 激化，在 568-574nm 發(fā)射熒光，呈鮮紅色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。 試劑盒內(nèi)容： 1．標記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2．末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3．DIG-dUTP(×20)20μl 4．封閉液(Blocking Reagent)4ml 5．生物素化抗抗體(× 100)20μl 6．SABC-CY3(× 100)20μl 7．Proteinase K(×200)50μl 8 抗體稀釋液 4ml |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調(diào)控；
⑤細胞分化及其調(diào)控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
叉頭框蛋白O3(FOXO3)英文名稱：FOXO3 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄同源蛋白質(zhì)CUX2抗體包裝1g
叉頭框蛋白M1(FOXM1)英文名稱：FOXM1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白146抗體包裝5g
叉頭框蛋白A2(FOXA2)英文名稱：FOXA2 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白147抗體包裝1g
層粘連蛋白β1(LAMβ1)英文名稱：LAMβ1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白158抗體包裝250mg
層粘連蛋白α1(LAMα1)英文名稱：LAMα1 ELISA Kit鈣粘附蛋白-11抗體包裝100g
補體因子D(CFD)英文名稱：CFD ELISA Kit核仁蛋白C23抗體包裝25g
補體因子B(CFB)英文名稱：CFB ELISA Kit皮膚相互作用蛋白2抗體包裝5g
補體成分5a受體1(C5aR1)英文名稱：C5aR1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框149抗體包裝25g
補體成分5a(C5a)英文名稱：C5a ELISA Kit碳化合物激結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)抗體包裝5g
補體成分5(C5)英文名稱：C5 ELISA Kit尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝1g
補體成分4b(C4b)英文名稱：C4b ELISA Kit補體C1qTNF8鏈多肽抗體包裝5g
補體成分4a(C4a)英文名稱：C4a ELISA Kit21號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
補體成分4(C4)英文名稱：C4 ELISA Kit磷化胞漿型磷脂A2抗體包裝5g
補體成分3(C3)英文名稱：C3 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框46抗體包裝1g
補體3a(C3a)英文名稱：C3a ELISA Kit20號染色體開放閱讀框103抗體包裝25g
鯊魚弧菌Vibrio│carchariae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品游離雌三試劑盒異鼠李-3-O-半乳糖苷;Isorha
假交替單胞菌Pseudoalteromonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR游離β絨毛膜促性腺激試劑盒茵芋堿;Skimmianine
沙門氏菌Salmonella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測定幽門螺旋菌抗體試劑盒一枝蒿庚;Bullatine G；so
細胞凋亡檢測試劑盒IV(CY3)釀酒酵母 利福霉SApat-1Elisa
松針散斑殼 3,4-二溴吡啶克氏錐蟲Elisa
枯草芽孢桿 (R)-2-甲基吡咯烷鹽酸鹽溶Elisa
深紅酵母 4-甲基-5-甲氧基-1,2,4-三唑啉-3-酮凋亡激活因子Elisa
微白類諾卡氏 (1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲支鏈氨基酸Elisa
凱斯特鞘氨單胞 4-氟間苯二肝糖原Elisa
尖角凸臍蠕孢 鹽酸沙格雷酯PPP1CaElisa
薔薇生鏈格孢 2-甲基硫代酰幽門螺桿IgG抗體Elisa
假單胞屬 4-芐基-2-嗎琳羧酸鹽酸鹽蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移1Elisa
Microterricola viridarii (S)-N-Boc-2-羥甲基嗎啉分泌型卷曲相關(guān)蛋白1Elisa
蘇云金芽孢桿 (R)-N-Boc-2-羥甲基嗎啉Dickkopf 3Elisa
膠孢 4-Boc-2-羥甲基嗎啉CTXIIIElisa
孢吸水鏈霉昆明變種 3-氯-4-苯5α-雙氫睪酮 Elisa
pYES3/CT 3-氯-6-噠性別決定區(qū)Y蛋白Elisa
青霉（加詞待譯） 4-羥基環(huán)己酮腎綜合征出血熱病抗體Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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