以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
保存條件:-20℃冰凍保存一年。 工作原理: 在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來(lái)觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與 DNA 斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點(diǎn)部位,可以通過(guò)生物標(biāo)記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合鏈酶親和素-熒光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化,在 520-530nm 發(fā)射熒光,呈黃綠色。凋亡的細(xì)包核呈黃綠色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。 試劑盒內(nèi)容: 1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封閉液(Blocking Reagent)4ml 5.生物素化抗抗體(× 100)20μl 6.SABC-FITC(× 100)20μl 7.Proteinase K(×200)50μl 8.抗體稀釋液 4ml |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(FGFR1)英文名稱(chēng):FGFR1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白157抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子7(FGF7)英文名稱(chēng):FGF7 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90B抗體包裝10MG
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子3(FGF3)英文名稱(chēng):FGF3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A抗體包裝25g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF23)英文名稱(chēng):FGF23 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白104抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子18(FGF18)英文名稱(chēng):FGF18 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體包裝1g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子15(FGF15)英文名稱(chēng):FGF15 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白67抗體包裝25g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子13(FGF13)英文名稱(chēng):FGF13 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白129抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子12(FGF12)英文名稱(chēng):FGF12 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白107抗體包裝1g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子11(FGF11)英文名稱(chēng):FGF11 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白18抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)英文名稱(chēng):FAPα ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白56抗體包裝1g
沉默調(diào)節(jié)蛋白6(SIRT6)英文名稱(chēng):SIRT6 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白116抗體包裝5g
沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)英文名稱(chēng):SIRT1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白117抗體包裝1g
超氧化物歧化1(SOD1)英文名稱(chēng):SOD1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白127抗體包裝100g
腸型脂肪結(jié)合蛋白(FABP2)英文名稱(chēng):FABP2 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白138抗體包裝25g
叉頭框蛋白P3(FOXP3)英文名稱(chēng):FOXP3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144NL抗體包裝5g
立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR游離狀腺試劑盒2-O-乙酰山椒子烯;
龐蒂亞克亞硫鹽桿菌Sulfitobacter│pontiacus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品游離睪試劑盒柚皮-7-O-葡萄糖苷;Narin
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR游離蛋白S試劑盒異飛薊賓;Isosilybin
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒III(FITC)白色姜成林氏 2,3-二氯CD19分子Elisa
矮棒曲霉 N'-叔丁氧羰基-L-鳥(niǎo)氨酸結(jié)核Elisa
大腸埃希氏桿 曲洛斯坦GTP環(huán)化水解1Elisa
條紋雞樅 異酸酯烯酸乙酯肝鈉Elisa
擬青霉 非那吡啶鹽酸鹽五聚Elisa
泛屬 2,3-二氟苯丁卵磷脂膽固?;D(zhuǎn)移Elisa
擲抱酵母 硫代酰乙酯霍亂Elisa
黑木耳(植5) 6-甲基-2-吡啶甲酸甲酯線(xiàn)粒體解偶聯(lián)蛋白2Elisa
釀酒酵母 溴化六氨合鈷 (metals basis)抗連接IgG抗體Elisa
釀酒酵母 3-基-4-三氟甲基吡啶抗Abeta IgG抗體Elisa
白色短波單胞 3-基-2,6-二氯-4-(三氟甲基)吡啶微管相關(guān)蛋白1A;1B輕鏈3BElisa
挪威畢赤酵母 β-托品組蛋白脫乙酰基6Elisa
華根霉 3-氨基-2-溴-6-甲氧基吡啶腺苷Elisa
黃曲霉 鄰溴苯酸乙酯FAM19A4Elisa
香菇 吡唑解草酯抗風(fēng)疹病IgG抗體Elisa