商品介紹:
目前常用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物有4種,DNA聚合酶α(DNA polymerase α),增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),Ki-67和5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Brdu)。其中Brdu為組織細(xì)胞非內(nèi)源性表達(dá)存在,應(yīng)用相對(duì)較廣。Brdu,也稱為溴化去氧尿苷,一種合成的胸苷類似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷選擇性結(jié)合到細(xì)胞DNA中。從而檢測細(xì)胞DNA合成和標(biāo)記細(xì)胞分裂,凋亡等行為。在遺傳研究中Brdu可通過活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加載,然后使用抗Brdu的單克隆抗體進(jìn)行特異性標(biāo)記,ICC或IHC法染色法顯示增殖細(xì)胞。另外,還能同時(shí)結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物,雙重染色,來判斷增殖細(xì)胞的種類,增殖速度等,對(duì)研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)有著重要意義。 CAS:59-14-3 分子式:C9H11BrN2O5 分子量:307.10 外觀:白色或類白色粉末 熔點(diǎn):187~189℃ 純度(Purity, HPLC):≥99% 溶解性:溶于1M 氫氧化銨(50 mg/ml),水(高達(dá)10 mg/ml);溶于DMF,DMSO,水(加熱)(50-100 mg/ml) 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
5-溴脫氧尿嘧啶核苷 | 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) | 100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
毒蕈堿型膽堿受體M3(CHRM3)英文名稱:CHRM3 ELISA Kit毛細(xì)管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體包裝100g
毒蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)英文名稱:CHRM2 ELISA Kit肌鈣集蛋白/收鈣抗體包裝25g
凋亡蛋白激活因子1(APAF1)英文名稱:APAF1 ELISA Kit鈣結(jié)合蛋白樣39抗體包裝5g
淀粉樣前體蛋白(APP)英文名稱:APP ELISA Kit癌胚抗原相關(guān)粘附分子3抗體包裝1ml
淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1(APLP1)英文名稱:APLP1 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框31抗體包裝1g
淀粉樣蛋白β1-42(Aβ1-42)英文名稱:Aβ1-42 ELISA Kit成簇相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
淀粉樣蛋白β1-40(Aβ1-40)英文名稱:Aβ1-40 ELISA Kit腫瘤/抗原2抗體包裝5g
碘腺原脫碘Ⅲ(DIO3)英文名稱:DIO3 ELISA Kit腫瘤/抗原1B包裝1g
碘腺原脫碘Ⅱ(DIO2)英文名稱:DIO2 ELISA Kit皮膚T淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達(dá)抗原6)包裝5g
抵抗(RETN)英文名稱:RETN ELISA Kit腫瘤/抗原3抗體包裝10mg
低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)英文名稱:HIF2α ELISA Kit腦多巴神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體包裝1g
低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)英文名稱:HIF1α ELISA Kit鈣依賴分泌激活蛋白2/自閉癥的相關(guān)蛋白抗體包裝5g
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)英文名稱:LRP1 ELISA Kit膽囊收縮A受體抗體包裝100mg
低密度脂蛋白受體銜接蛋白1(LDLRAP1)英文名稱:LDLRAP1 ELISA Kit小腦肽3抗體包裝1g
低密度脂蛋白受體(LDLR)英文名稱:LDLR ELISA Kit周期依賴性激樣5抗體包裝1g
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,醋鹽形式遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白1試劑盒鹽伊立替康;Irinotecan hy
: ivcas7.00510資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>920U/MG,USP原纖維蛋白-1試劑盒氧化前胡;Oxypeucedanin
Z20259資源名稱: 嗜熱鏈球菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%原鈣黏1試劑盒羊藿次苷I;Icarisid I
5-溴脫氧尿嘧啶核苷Paraconiothyrium sp. 4-乙酸乙酯植酸Elisa
火木層孔 六鈷酸鋅植酸Elisa
異常漢遜酵母 鹽酸奧洛他定癸酸甘油酯-1Elisa
鍺栓孔 (淡黃褐栓) 1-(N-Boc-氨乙基)哌40S核糖體蛋白S3Elisa
德氏乳桿保加利亞亞種 4-脲脊髓灰質(zhì)炎病IgG抗體Elisa
脫硫弧脫硫亞種(脫硫微螺、脫硫螺、脫硫桿、脫硫芽孢弧、脫硫?。?/span> 乙二四乙酸銅鈉二水合物脊髓灰質(zhì)炎病IgM抗體Elisa
松針散斑殼 苯基胍碳酸鹽可溶性CD28分子Elisa
生假絲酵母 5-甲基-2-呋喃基質(zhì)金屬蛋白14Elisa
腫痂鏈霉 2,2-二甲基-3-羥基酸甲酯狀瘤病16抗體Elisa
光柄滑銹傘 2-甲氧基-4-甲基嘧啶狀瘤病18抗體Elisa
遼寧類芽孢桿 4-巴豆酸抗Sa抗體Elisa
蟻巢傘屬 羥酸銨鹽球蛋白G Fc段受體ⅠElisa
大腸埃希 球蛋白G Fc段受體ⅡElisa
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 三乙酰酮鋁性休克綜合征1Elisa
釀酒酵母 3,5-二溴吡啶-4-甲酸色P4502D6Elisa