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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1ml|10×1ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9549 | 應用領域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產品僅供科研 | 英文名稱 | Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein |
phospho-arfaptin 2(Ser260) 化ADP核糖化因子結合蛋白2抗體重氮酯 91%,≤10% dichloromethane
phospho-Arhgef2(Ser810) 化Rho鳥苷交換因子2抗體4－羥－環己烷酯 98%
Aromatase
phospho-arfaptin 2(Ser260) 化ADP核糖化因子結合蛋白2抗體重氮酯 91%,≤10% dichloromethane
phospho-Arhgef2(Ser810) 化Rho鳥苷交換因子2抗體4－羥－環己烷酯 98%
Aromatase
詳細介紹
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein | 1ml|10×1ml | 1～3天 |
商品介紹：
本品是一種可以表達GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染細胞或組織后進行細胞自噬(autophagy)的檢測。 LC3是酵母自噬關鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究為廣泛。到目前為止，LC3B被認為是細胞自噬信號通路為關鍵的標志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的甘氨酸，人們把它命名為胞質形式的LC3B I。在細胞自噬的過程中，其C端暴露的甘氨酸經過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶， 以ATG3為E2樣連接酶，以Atg12-Atg5-Atg16復合物為E3樣連接酶，在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體的內膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內膜上的LC3B II則被溶酶體內的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其強的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染細胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細胞質中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點的形式表現出來。 自噬是一種在進化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細胞內分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關，在饑餓等不利的環境條件下， 細胞通過自噬降解多余或異常的細胞內組分，為細胞的生存提供能量及原材料，促進生物體的生長發育、細胞分化及對環境變化產生應答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關系。由于細胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經成為細胞生物學領域的一個新的研究熱點。 Ad-GFP-LC3B是的重組腺病毒，感染后能夠在靶細胞中有效表達綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現明亮的綠色熒光，可以用于細胞自噬的檢測。 腺病毒感染細胞后為瞬時表達，通常不會與基因組DNA重組，不能用于篩選穩定細胞株。本產品感染體內外細胞后，有效表達時間通常不少于7天，不同細胞和組織的有效表達時間有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表達很可能會大大減弱。 Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重組腺病毒載體系統，感染普通的細胞后不能進行擴增和重組，從而可以有效降低本產品在活體生物中的風險。 本產品可以在表達E1的HEK293A、HEK293等適當細胞中擴增。 本產品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用時可以按照108pfu/ml進行計算。如果按照20 MOI感染6孔板的細胞，每孔50萬細胞計算，共可以感染10個孔；如果按照20 MOI感染24孔板的細胞，每孔10萬細胞計算，共可以感染50個孔。如果MOI值提高，則相應可以感染的孔數會減少；如果MOI值降低，則相應可以感染的孔數會增加。 儲存條件：-20℃，有效期1～2個月。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
凝血因子Ⅷ(FⅧ)英文名稱：FⅧ ELISA Kit銜接蛋白β抗體包裝1g
凝血因子Ⅶ(FⅦ)英文名稱：FⅦ ELISA Kit銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體包裝250mg
凝血因子Ⅵ(FⅥ)英文名稱：FⅥ ELISA Kit通道蛋白-9抗體包裝5g
凝血因子Ⅴ(FⅤ)英文名稱：FⅤ ELISA Kit膜粘連蛋白A3抗體包裝1g
凝血因子Ⅳ(FⅣ)英文名稱：FⅣ ELISA Kit膜粘連蛋白 A4抗體包裝50mg
凝血因子Ⅲ(FⅢ)英文名稱：FⅢ ELISA Kit自噬相關蛋白8A抗體包裝1g
凝血因子Ⅱ(FⅡ)英文名稱：FⅡ ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝25g
凝血因子Ⅰ(FⅠ)英文名稱：FⅠ ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝5g
凝血原片段F1+2(F1+2)英文名稱：F1+2 ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝1g
凝血受體(TR)英文名稱：TR ELISA Kit脫氧胞苷脫蛋白抗體包裝250mg
凝血抗凝血復合物(TAT)英文名稱：TAT ELISA Kit蛋白激錨定蛋白13抗體包裝1g
凝溶膠蛋白(Gelsolin)英文名稱：Gelsolin ELISA KitAP-1μ2抗體包裝5g
尿微量白蛋白(ALB)英文名稱：ALB ELISA Kit肥大膜抑制性受體Allergin1抗體包裝5g
尿嘧啶核苷磷化1(UPP1)英文名稱：UPP1 ELISA Kit腦鈉通道蛋白1抗體包裝25MG
尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)英文名稱：PLAUR/uPAR ELISA Kit肌動蛋白相關蛋白2/3復合亞單位B1抗體包裝25g
α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1免疫球蛋白G(IgG)Nintedanib (BIBF 1120) is a potent triple angiokinase inhibitor for VEGFR1/2/3,
Ad-GFP-LC3B彎孢 中國肉桂皮油半乳糖凝集素9檢測試劑盒
枯草芽孢桿 黑莓提取物胞漿型磷脂酶A2檢測試劑盒
大腸埃希氏桿 秘魯浸膏胞外超氧化物歧化酶檢測試劑盒
茯苓 杏子提取物飽腹因子檢測試劑盒
熒光假單胞 蘋果粉吡啶交聯物檢測試劑盒
美澳型核果褐腐病 甘草提取物（粉）表面活性蛋白A檢測試劑盒
放線纖維 KN-62表面活性蛋白D檢測試劑盒
藍色犁頭霉 磷脂酰甘油 PG表皮生長因子檢測試劑盒
休哈塔假絲酵母 4-(三氟甲基)噠-3,5-二總表皮生長因子受體檢測試劑盒
連香樹迪茲氏 2-氯-4-氨基-5-甲氧基嘧啶表皮生長因子受體2檢測試劑盒
巨大芽孢桿 N,N-二甲基對甲苯氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒
食吡啶紅球 烯酸烯酯二檢測試劑盒
普通青霉 丁酸橙花酯酮檢測試劑盒
釀酒酵母 三正丁基膦酮酸激酶M2型同工酶檢測試劑盒
小牛葡萄球 1-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-3-甲基-1-丁酮酮酸脫氫酶激酶1檢測試劑盒
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