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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 10:36:40瀏覽次數(shù)：355
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5mg |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9548 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Cell?proliferation?tracer?fluorescence?probe |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Cell proliferation tracer fluorescence probe | 5mg | 1～3天 |
商品介紹：
本品是一種近年來被廣泛應(yīng)用的細(xì)胞增殖檢測(cè)用熒光探針，也可以用于細(xì)胞的熒光示蹤?；贑FDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測(cè)和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測(cè)結(jié)果*一致，但同時(shí)可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測(cè)可以提供整個(gè)細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時(shí)如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。 CAS：150347-59-4 分子式：C29H19NO11 分子量：557.47 CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且 分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。 由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。采用CFDA SE通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)獲得的檢測(cè)結(jié)果參考右圖。每一個(gè)峰代表一種分裂次數(shù)的細(xì)胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會(huì)逐漸減少直至檢測(cè)不到。 使用CFDA SE可以檢測(cè)分裂多達(dá)8次或更多次數(shù)的細(xì)胞增殖。目前CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。 CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞也可以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。 CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞無論在體外還是體內(nèi)都不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會(huì)從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞僅需5-15分鐘即可完成。對(duì)于不同細(xì)胞，佳標(biāo)記時(shí)間需自行摸索。 CFDA SE可以使用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制，配制濃度通常為2-10mM。配制好的溶液宜當(dāng)天使用完畢，不宜長(zhǎng)時(shí)間保存。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞時(shí)的終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。在工作濃度為5μM時(shí)，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品共可以標(biāo)記約1.8升的細(xì)胞。 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期6個(gè)月。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
蘋果脫氫(MDH)英文名稱：MDH ELISA Kit通道蛋白-2抗體包裝25g
嘌呤核苷磷化(PNP)英文名稱：PNP ELISA Kit血管緊張?jiān)贵w包裝10MG
皮質(zhì)/腎上腺(CORT)英文名稱：CORT ELISA Kit雄激受體抗體包裝10MG
皮質(zhì)(Cortisol)英文名稱：Cortisol ELISA Kit死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱蛋白激活抑制劑)包裝25g
胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)英文名稱：M30 ELISA Kit軸蛋白1抗體包裝5g
膀胱腫瘤抗原(BTA)英文名稱：BTA ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白9B抗體包裝25ml
牛小腸堿性磷(CIAP)英文名稱：CIAP ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白12抗體包裝5ml
凝血因子XIII B(F13B)英文名稱：F13B ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白13抗體包裝25g
凝血因子XIII A1(F13A1)英文名稱：F13A1 ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)英文名稱：F8aLC ELISA Kit整合樣金屬蛋白與凝血4型抗體包裝100mg
凝血因子Ⅻ(FⅫ)英文名稱：FⅫ ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝25g
凝血因子Ⅺ(FⅪ)英文名稱：FⅪ ELISA Kit磷化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g
凝血因子Ⅹ(FⅩ)英文名稱：FⅩ ELISA Kit絲/蘇蛋白激ATR抗體包裝10g
凝血因子Ⅸ(FⅨ)英文名稱：FⅨ ELISA Kit去整合樣金屬蛋白18抗體包裝250g
凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)英文名稱：FⅧ-Ag ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體包裝50g
腺苷激抗體免疫球蛋白G(IgG)Nintedanib (BIBF 1120) is a potent triple angiokinase inhibitor for VEGFR1/2/3,
細(xì)胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)干草鞘氨單胞 津巴布韋凈油白介素7檢測(cè)試劑盒
屎腸球 草莓粉白介素8檢測(cè)試劑盒
黃孢原毛平革 無花果提取物白介素9檢測(cè)試劑盒
耐輻射奇球 葫蘆巴酊白抗原G檢測(cè)試劑盒
仁果褐腐串珠霉 葫蘆巴浸膏白衍生趨化因子2檢測(cè)試劑盒
多產(chǎn)色鏈霉 棗子酊白血病抑制因子檢測(cè)試劑盒
中慢生華癸根瘤 咖啡提取物半胱氨酸蛋白酶1檢測(cè)試劑盒
枯草芽孢桿 葡萄粉半胱氨酸蛋白酶3檢測(cè)試劑盒
青色鏈霉 梅子汁濃縮物半胱氨酸蛋白酶8檢測(cè)試劑盒
黑根霉 李子汁濃縮物半胱氨酸蛋白酶9檢測(cè)試劑盒
粘性絲孢酵母 可可殼酊半胱氨酸蛋白酶抑制劑;胱抑素C檢測(cè)試劑盒
黑曲霉 丁香花蕾油半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒
冷溫木拉克酵母 菊苣浸膏半乳糖凝集素1檢測(cè)試劑盒
長(zhǎng)枝木霉 櫻桃粉半乳糖凝集素2檢測(cè)試劑盒
雞傷寒沙門氏 羅馬春*提取物半乳糖凝集素3檢測(cè)試劑盒
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