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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 13:08:34瀏覽次數(shù)：213
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T|100T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9677 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Nuclear Extraction Kit |
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：細(xì)胞核提取試劑盒
英文名稱：Nuclear Extraction Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T
發(fā)貨周期：1～3天
商品介紹：
細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。 操作步驟： 1. 樣本處理 a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織，可用雙層紗布過(guò)濾。 b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×107個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50μL Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。 2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，4℃，700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。 3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。 4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。 5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。 儲(chǔ)存條件：4℃ |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Corin蛋白(CRN)英文名稱：CRN ELISA KitCD80抗體包裝250mg
Cerberus蛋白(CER)英文名稱：CER ELISA KitCD19抗體包裝1g
CD83分子(CD83)英文名稱：CD83 ELISA KitC-C元件趨化因子26抗體包裝250mg
CD5抗原樣蛋白(CD5L)英文名稱：CD5L ELISA Kit5號(hào)染色體開放閱讀框22抗體包裝25g
CD40配體(CD40L)英文名稱：CD40L ELISA Kit鈣激活離子通道4蛋白抗體包裝5g
CD3d分子(CD3d)英文名稱：CD3d ELISA Kit嗜粒趨化蛋白3抗體包裝1g
CD320分子(CD320)英文名稱：CD320 ELISA Kit嗜粒趨化蛋白3抗體包裝250mg
CD30配體(CD30L)英文名稱：CD30L ELISA Kit趨化抗體包裝25g
CD163分子(CD163)英文名稱：CD163 ELISA Kit5號(hào)染色體開放閱讀框55抗體包裝5g
CD14分子(CD14)英文名稱：CD14 ELISA Kit表面趨化因子受體7抗體包裝1g
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)英文名稱：CEBPβ ELISA Kit色c氧化7A2抗體包裝5g
C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)英文名稱：C4BPα ELISA KitCD36抗體包裝100g
B-細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl2)英文名稱：Bcl2 ELISA Kit固合成CYP11B2抗體包裝25g
B-細(xì)胞激活因子受體(BAFFR)英文名稱：BAFFR ELISA Kit7號(hào)染色體開放閱讀框16抗體包裝5g
B-細(xì)胞激活因子(BAFF)英文名稱：BAFF ELISA Kit10號(hào)染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
: IFFI2377資源名稱: 黑曲霉 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品乙酰肝試劑盒銀鍛苷;Tiliroside
淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格：純度>99%,AR乙酰羧化合成試劑盒印;Indaconitone
IMRUR1547資源名稱: 披發(fā)糖多孢菌 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品乙酰酯試劑盒鹽黃柏堿;Phellodendrine
細(xì)胞核提取試劑盒香菇 7-溴-2,4(1H,3H)-喹唑啉二酮并殖吸蟲Elisa
美人魚發(fā)光桿美人魚亞種 (E)-3-(叔丁基二甲基硅氧基)烯-1-基-酸頻哪酯鞭毛蟲Elisa
仁果叢梗孢 N-CBZ-甘氨酸乙酯布魯東氏酪氨酸激Elisa
醋化醋桿 3-Boc-6-氧雜-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷Wnt-3a蛋白Elisa
尖孢 2,3,6-三氟苯基乙酸低氧誘導(dǎo)因子Elisa
格爾木馬賽 伊班磷酸甘肽Elisa
嗜熱鏈球 苯并[b]噻吩并-3-基酸鼠基因相關(guān)蛋白Elisa
假單胞 3,5-二甲基-吡唑-4-羧酸轉(zhuǎn)化蛋白R(shí)hoA-GTPElisa
綠粘帚霉 Boc-D-精氨酸鹽酸鹽谷氨酸氧化Elisa
平滑白蛋巢 (1S,4S)-2-Boc-2,5-二氮雙環(huán)[2.2.1]庚烷谷氨酸氧化Elisa
冬菇屬 1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸β位淀粉樣前體蛋白裂解1Elisa
節(jié)桿 2-氨基-4-苯基酮戊二酸Elisa
灰色鏈霉灰色亞種 B-(6,9-二苯基-9H-咔唑-3-基)酸EB病抗體Elisa
洋蔥伯克霍爾德 3-(二甲氨基)-2-異基烯酸甲酯α淀粉Elisa
膠孢 2-(2-氯-5-苯甲基)-5-(6-氟吡啶-3-基)噻吩膽囊收縮;縮膽囊八肽Elisa
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