以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
MTT細胞增值與毒性檢測試劑盒 | MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit | 500T | 1~3天 |
商品介紹:
MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan,在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解,然后通過酶標儀可以測定490nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。 使用說明: 1.收集對數(shù)期細胞,調(diào)整細胞懸液濃度,分于96孔板,每孔180μL,3000-10000個細胞/孔。 2.置37℃、5%CO2溫箱培養(yǎng)使細胞貼壁,培養(yǎng)6-24小時。 3.加入適當濃度的受試化合物,繼續(xù)培養(yǎng)適當時間。 4.小心吸去上清,加入90μL新鮮培養(yǎng)液,再加入10μL MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4 h。 5.然后吸掉上清,每孔加入110μL Formazan溶解液,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490 nm處測量各孔的吸光值。 6.同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、 Formazan溶解液),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、 Formazan溶解液),每組設(shè)定3復孔。 儲存條件:-20℃ |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
D-二聚體(D2D)英文名稱:D2D ELISA Kit原癌蛋白CBL2抗體包裝5g
D-多巴色變位(DDT)英文名稱:DDT ELISA Kit信號調(diào)節(jié)蛋白α抗體包裝1g
DNA修復蛋白RAD50(RAD50)英文名稱:RAD50 ELISA Kit信號淋巴活化分子CD150抗體包裝5g
DNA損傷誘導轉(zhuǎn)錄因子3(DDIT3)英文名稱:DDIT3 ELISA Kit巨噬炎性蛋白16抗體包裝10g
DNAⅠ樣蛋白3(DNASE1L3)英文名稱:DNASE1L3 ELISA Kit果蠅CG6856-PA抗體包裝5g
DNA基轉(zhuǎn)移3B(DNMT3B)英文名稱:DNMT3B ELISA Kit色c氧化COX7A2抗體包裝1g
DNA基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)英文名稱:DNMT1 ELISA Kit剪切和多聚腺苷化特異性因子4抗體包裝25g
DNA激活蛋白激催化亞基肽(PRKDC)英文名稱:PRKDC ELISA Kit組織蛋白E抗體包裝5g
Discs大同源物4(DLG4)英文名稱:DLG4 ELISA Kit緊密連接蛋白5抗體包裝25g
Discoidin域受體家族成員1(DDR1)英文名稱:DDR1 ELISA Kit分化周期CDC42相互作用蛋白4抗體包裝5g
Dickkopf相關(guān)蛋白4(DKK4)英文名稱:DKK4 ELISA Kit周期蛋白依賴性激樣3抗體包裝100ml
Dickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)英文名稱:DKK1 ELISA Kit殺菌肽/天蠶抗菌肽單克抗體包裝25ml
C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)英文名稱:XPC ELISA Kit第十七號染色體開放閱讀框87抗體包裝1g
C-型鈉尿肽(CNP)英文名稱:CNP ELISA Kit降鈣受體抗體包裝25g
C-肽(C-Peptide)英文名稱:C-Peptide ELISA Kit補體C2a鏈多肽抗體包裝5g
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:purity>97%,BR乙型肝炎病e抗原試劑盒野鷲尾苷;Lridin
: ivcas7.00265資源名稱: 球形賴芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,單醋鹽乙型肝炎病e抗體試劑盒芫花;Genkwanin
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR乙型肝炎表面抗原試劑盒3-乙酰基乳香 ;alpha-bosw
MTT細胞增值與毒性檢測試劑盒樟疫霉 4-氯-3,5-二氟載脂蛋白A5Elisa
擬康寧木霉 3-溴-6,9-二苯基-9H-咔唑煙酰Elisa
擬青霉 3-氨基-N-CBZ-吡咯烷鹽酸鹽結(jié)核桿IgM抗體Elisa
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 Cbz-1-氨基-1-環(huán)基線粒體呼吸鏈復合物IElisa
蓋氏海桿狀 5-溴乙酰基-2-羥基苯甲N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體A1亞單位NR4Elisa
帚狀曲霉 7-基啉15脂加氧1Elisa
大腸埃希 2-氨基-3-氟苯藍氏賈第鞭毛蟲Elisa
粘孢白僵 DL-脯氨酰鹽酸鹽β-乳球蛋白Elisa
黃曲霉 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][(苯硫基)亞甲基](三環(huán)己基膦)二氯化釕酪蛋白Elisa
棒形青霉 N,N-雙叔丁氧羰基-N-烯血吸蟲Elisa
枯草芽孢桿 2-異基-4,5-二甲基-1H-咪唑藍氏賈第蟲Elisa
地衣芽胞桿 1-Boc-4-溴-1H-吡唑痢疾阿米巴Elisa
三線鐮孢 Boc-D-2,4-二氯苯氨酸包蟲病Elisa
爪哇根霉 磺達肝癸鈉隱孢子蟲Elisa
巨大芽孢桿 A 7-溴-1,2,3,4-四氫喹啉鹽酸絲蟲Elisa