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詳細介紹
商品介紹：
本試劑盒可應用于培養細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V 被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素（EGFP、FITC）標記，以標記了的Annexin V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。與FITC 的綠色熒光信號相比，EGFP 的綠色熒光信號具有信號強，不易淬滅，穩定性高等優點，故本試劑盒采用EGFP作為熒光標記探針。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。 |
產品屬性：
中文名稱：Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱：Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
產品規格：10T|20T|50T|100T
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
金屬硫蛋白2(MT-2)英文名稱：MT-2 ELISA Kit去整合樣金屬蛋白12包裝250mg
金屬硫蛋白1(MT-1)英文名稱：MT-1 ELISA Kit磷化乙酰羧化1ACCα抗體包裝5g
解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)英文名稱：ADAM9 ELISA Kit膜粘連蛋白2受體抗體包裝100ml
解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)英文名稱：ADAM8 ELISA Kit晚期糖基化終末產物特異性受體抗體包裝1g
解脲脲原體抗體(UU-Ab)英文名稱：UU-Ab ELISA KitADCK5蛋白抗體包裝5g
睫狀神經營養因子(CNTF)英文名稱：CNTF ELISA Kit艾滋病病復制結合蛋白抗體包裝1g
結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)英文名稱：Hpt/HP ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g
結締組織生長因子(CTGF)英文名稱：CTGF ELISA KitHIV-1病復制結合蛋白2抗體包裝100g
結蛋白(Des)英文名稱：Des ELISA Kit伴侶蛋白bc1同源復合體抗體包裝25g
窖蛋白Caveolin1(Cav-1)英文名稱：Cav-1 ELISA Kit心肌錨蛋白重復結構域1抗體包裝5g
角化細胞生長因子(KGF/FGF-7)英文名稱：KGF/FGF-7 ELISA Kit抑制蛋白結構域蛋白1抗體包裝25g
角化細胞內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)英文名稱：AR ELISA Kit抑制蛋白結構域蛋白2抗體包裝5g
膠原II(Collagenase II)英文名稱：Collagenase II ELISA Kit抑制蛋白結構域蛋白3抗體包裝1g
膠原I(Collagenase I)英文名稱：Collagenase I ELISA Kit抑制蛋白結構域蛋白4抗體包裝5g
膠原吡啶交聯(PYD)英文名稱：PYD ELISA Kit雌二抗體包裝1g
磷化通道蛋白2抗體促腎上腺皮質激(ACTH)Oxiracetam, a cyclic derivative of gamma-aminobutyric acid (GABA), is used as a
Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒中國臺灣根霉 3-基一磷酸腺苷檢測試劑盒
禽腺病Ⅶ型 N-丁基吡啶雙(三氟甲磺酰)亞鹽二磷酸腺苷檢測試劑盒
木賊鐮孢 O-(叔丁基)-D-絲氨酸二氫嘧啶脫氫酶檢測試劑盒
富養羅爾斯通氏 1-BOC-4-甲酰肼二氫嘧啶脫氫酶檢測試劑盒
芽孢桿 5-氯乙基四氮唑二氫乳清酸脫氫酶檢測試劑盒
孢吸水鏈霉 2,4-二氯噻吩[2,3-D]嘧啶二肽基肽酶Ⅳ檢測試劑盒
荷葉蘑 2-氯-3-硝基-6-苯基吡啶二氧化硫檢測試劑盒
多欄純潔桿 癸二反應蛋白7A域檢測試劑盒
蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 1-叔丁基-3-氨基氮雜環丁烷泛連接蛋白1檢測試劑盒
Arthrobacter 2-基-泛素檢測試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞 4-基肉桂酸泛素A52殘留核糖體蛋白融合產物1檢測試劑盒
孢小克銀漢霉 5-氨基-3-溴-2-甲基吡啶泛素C末端水解酶L1檢測試劑盒
球孢白僵 4-氟-3-羥基苯泛素蛋白D檢測試劑盒
暗灰鏈霉 5-氯-2-氟苯酚泛素連接酶檢測試劑盒
釀酒酵母 2-(2-1H-咪唑基)吡啶芳香化酶檢測試劑盒
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