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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細胞，但能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 操作步驟： 1、細胞樣品的準備： a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調節其濃度為 1×106/ml。 4、取 100μl的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。 6、在反應管中加 400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。 Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜 Jurkat細胞用順鉑誘導凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜 儲存條件：2～8℃，避光保存 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
抗內皮細胞抗體(AECA)英文名稱：AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g
抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)英文名稱：ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關蛋白TGFb信號抗體包裝100g
抗酒石性磷5b(TRACP-5b)英文名稱：TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g
抗酒石性磷5b(TRACP5b)英文名稱：TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉移α4Gn-T抗體包裝5g
抗酒石性磷(TRACP)英文名稱：TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基抗體包裝10ml
抗抗體(AsAb)英文名稱：AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白4抗體包裝1g
抗狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)英文名稱：ATGA/TGAB ELISA Kit基乙二半脫氫磷泛酰巰基乙轉移抗體包裝25g
抗狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)英文名稱：TPO-Ab ELISA Kit賴戊二還原抗體包裝5g
抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)英文名稱：EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復域6抗體包裝25g
抗環胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)英文名稱：Anti-CCP-antibody ELISA Kit精2抗體包裝5g
抗紅細胞抗體(RBC)英文名稱：RBC ELISA Kit固還原家族1成員C3抗體包裝1g
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)英文名稱：gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質激受體包裝5g
抗核抗體(ANA)英文名稱：ANA ELISA Kit褐黑相關蛋白ART抗體包裝1g
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)英文名稱：ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg
抗單核細胞抗體(AMA)英文名稱：AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關蛋白抗體包裝5g
磷化粘附相關激抗體促腎上腺皮質激(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激的 IC5
Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒釀酒酵母 N-十八烷基苯甲酰低密度脂蛋白受體相關蛋白6檢測試劑盒
潮汐紅色桿 (3S,4S)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯低氧誘導因子-1α檢測試劑盒
釀酒酵母 3-溴-4-甲氧基苯低氧誘導因子-2α檢測試劑盒
纖維黃鏈霉 間甲苯磺酰氯抵抗素檢測試劑盒
米川黃桿 2,7-二甲基咔唑凋亡誘導因子檢測試劑盒
鏈輪枝屬 苯基基氫氧化銨(的甲溶液)凋亡相關因子配體檢測試劑盒
阪崎腸桿 1-叔丁氧羰基-4-氨基鹽酸鹽丁型肝炎IgG抗體檢測試劑盒
嗜線蟲賽雷氏 六水六氟硅酸鎂蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M2抗體檢測試劑盒
蠟磨屬 5-溴-2-氯苯甲蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M3檢測試劑盒
小海螺 4,5-二氟鄰苯二甲酸端粒酶檢測試劑盒
栗疫病 4,5-二氟鄰苯二甲酸酐端粒酶逆轉錄酶檢測試劑盒
肋生鹽弧肋生亞種 1-異基吡唑對稱性二甲基精氨酸檢測試劑盒
教堂小短桿 4-叔丁氧羰基-2-嗎啉甲酸對氧磷酶檢測試劑盒
多產色鏈霉 1-Boc-4-甲基-4-甲酸對氧磷酶1檢測試劑盒
大腸埃希 3,4-二氟水楊酸多巴檢測試劑盒
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