商品介紹:
用途: 軟骨染色 注意事項: 主要由固綠染色液和番紅O染色液組成。染色時,注意分化時間,否則容易導致過染或脫色 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
6'-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷英文名稱: Ponceau 2RA型流感病H3N2-M2蛋白抗體包裝1g
6'-O-β-D-芹糖獐芽菜苷英文名稱: Rose bengalHSH2D抗體包裝250mg
6,7,4'-三羥基異黃英文名稱: Azophloxine蛭抗體包裝25g
6-氧基二氫血根堿英文名稱: Eosin Y ,alcohol solution白抗原A抗體包裝5g
6-氧基山柰酚-3-O-蕓香糖苷英文名稱: Eosin B人瘤病16型E7抗體包裝1g
6-姜酚(姜辣)英文名稱: Fast Garnet GBC Salt人類狀瘤病58 E6蛋白抗體包裝5g
6-姜烯酚(標準品)英文名稱: Fast Red 3 GL Salt人類狀瘤病16抗體包裝100g
6-羥基(標準品)英文名稱: Fast Red KL Salt人類狀瘤病18 E7抗體包裝25g
6-基異麥冬黃烷A(標準品)英文名稱: Fast Red B Salt人類狀瘤病31 E7抗體包裝5g
7,4'-二羥基黃(標準品)英文名稱: Fast Red TR Salt 1,5-naphthalenedisulfonate salt轉(zhuǎn)錄因子HES2抗體包裝1g
7,8-二氫生物蝶呤英文名稱: Ponceau S轉(zhuǎn)錄因子HES3抗體包裝5g
7-O-基蘆薈新甙A(標準品)英文名稱: Ciprofibrate多磷肌激IPMK抗體包裝1g
7-O-基芒果苷(標準品)英文名稱: Eosin Y water solutionIKK復合物相關(guān)蛋白抗體包裝5g
7-O-乙基莫諾苷英文名稱: Azocarmine BIQSEC2抗體包裝100g
7-表紫杉(標準品)英文名稱: Azocarmine G交叉蛋白2抗體包裝25g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR淋巴趨化因子試劑盒基黃連堿;Worenine chlor
蒼白彎孢Curvularia│pallescens 質(zhì)量規(guī)格:>98%,反式,BR淋巴抗原6復合物基因座A試劑盒吉馬;Germacrone
大島芽孢桿菌Bacillus│oshimensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR淋巴功能相關(guān)抗原3試劑盒劍麻皂苷元;Tigogenin
改良番紅O-固綠軟骨染色液粉擬青霉 芴甲氧羰酰基正亮氨酸類粘蛋白Elisa
相思根瘤 硫酸鋇亞硫酸還原Elisa
大豆慢生根瘤 1-氯-3-(三氟甲氧基)苯腺苷-5-磷酰硫酸還原Elisa
密旋鏈霉 3,5-二氯-4-氟三氟甲苯氧乙酰絲氨酸 (硫)裂解Elisa
黃桿 4-苯基ATP硫酸化Elisa
賴氨酸芽胞桿屬 FMOC-肌氨酸可溶性淀粉合成Elisa
嗜鹽四聯(lián)球 1-金剛烷甲磷脂CElisa
谷氨酸棒狀桿(黃色短桿)* 三氯化鈦(III)溶液磷脂DElisa
大腸埃希 章鹽酸鹽胰高血糖Elisa
福山假絲酵母 溴化鋅蕪菁花葉病Elisa
鴨疫里氏桿 D-3-(2-萘基)-氨酸甘油三磷酸脫氫Elisa
橙色桿狀 4-溴-3-甲酸酰基合成Elisa
褐球固氮* 2,3,5,6-四氟二酰基甘油酰基轉(zhuǎn)移Elisa
埃切畢赤酵母 Boc-3-(1-萘基)-D-氨酸馬鈴薯病XElisa
球孢白僵 3-基-4,6-二甲基-2-羥基吡啶二磷酸腺苷Elisa