詳細介紹
商品介紹:
本試劑盒是一種采用Annexin V-FITC與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發生在細胞膜表面,這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外,使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂,正常主要存在于細胞膜的內面,在細胞發生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性,對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的,也可發生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的,而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)不能通過完整的活細胞,但能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色, 因此通常將Annexin V與PI配合染色, 以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 操作步驟: 1、細胞樣品的準備: a.對于貼壁細胞:小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的培養液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。 b.對于懸浮細胞:1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。 2、用去離子水按 1:3 稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞,調節其濃度為 1×106/ml。 4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。 6、在反應管中加 400μl PBS,流式細胞儀(FACS)分析。 儲存條件:2~8℃,避光保存 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)英文名稱:PCNA ELISA Kit肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體包裝5ml
抗(AT)英文名稱:AT ELISA Kit蛋白激A2抗體包裝1g
抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)英文名稱:PA-IgG/M/A ELISA Kit血管緊張Ⅱ受體2抗體包裝5g
抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)英文名稱:ACA-IgM ELISA KitASH1蛋白抗體包裝100g
抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)英文名稱:ACA-IgG ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白2抗體包裝25g
抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)英文名稱:ACA-IgA ELISA Kit血管內皮遷移蛋白抗體包裝5g
抗心肌抗體(AMA)英文名稱:AMA ELISA Kit糖還原相關蛋白質抗體包裝100g
抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)英文名稱:snRNP/Sm ELISA Kit膽汁結合蛋白DDH2抗體包裝25g
抗線粒體抗體(AMA)英文名稱:AMA ELISA Kit血管生成樣蛋白3抗體包裝500g
抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)英文名稱:aZP-IgG ELISA Kit甘油酯激線粒體抗體包裝50MG
抗透明帶抗體(aZP)英文名稱:aZP ELISA Kit磷化內收蛋白a1抗體包裝25ml
抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)英文名稱:dsDNA ELISA Kit自噬體ATG16L2蛋白抗體包裝1g
抗平滑肌抗體(ASMA)英文名稱:ASMA ELISA Kit性磷抗體包裝100g
抗凝血受體(ATR)英文名稱:ATR ELISA Kit性磷抗體包裝25g
抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)英文名稱:AT-Ⅲ ELISA Kit光激A相互作用蛋白1抗體包裝25g
粘附相關激抗體B-淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2)Palbociclib hydrochloride是高選擇性的 CDK4/6 抑制劑,IC50 分別為11 nM 和 16 nM。
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒大腸桿 5-氟-2-甲氧基苯甲蛋白酪氨酸磷酸酶檢測試劑盒
鮭色沉積物桿狀 Fmoc-Glu(EDANS)-OtBu蛋白酪氨酸磷酸酶檢測試劑盒
籃狀屬 5-甲氧基苯并[B]噻吩-2-酸蛋白酪氨酸磷酸酶1B檢測試劑盒
平菇 2-氨基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯蛋白磷酸酶檢測試劑盒
三葉草根瘤 N-Boc-3-溴甲基蛋白酶激活受體4檢測試劑盒
毛柄(金針菇) 3-氟-4-甲蛋白質二硫鍵異構酶檢測試劑盒
異常漢遜酵母異常變種 2-氯-6-基異硫酸酯刀豆素A檢測試劑盒
土曲霉 1,3-二氯-2-苯低半乳糖化IgA檢測試劑盒
釀酒酵母 4-(2-氨基乙基)哌-1-甲酸叔丁酯低分子肝素檢測試劑盒
凍土毛霉 2-甲基-3-噻吩甲酸低密度脂蛋白檢測試劑盒
硬炭團 4-N-Cbz-2-羥甲基哌低密度脂蛋白膽固檢測試劑盒
泛養副球 4-甲苯磺酰低密度脂蛋白受體檢測試劑盒
菲爾德斯半島擬諾卡氏 1,2,3,4-四氫-1-萘甲酸低密度脂蛋白受體相關蛋白1檢測試劑盒
米曲霉 2-溴苯并[9,10]菲低密度脂蛋白受體相關蛋白4檢測試劑盒
還原硫酸鹽互營桿* 2-異基苯低密度脂蛋白受體相關蛋白5檢測試劑盒