以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1) | Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1 | 100T | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)是一種以JC-1為熒光探針,快速靈敏地檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位變化的試劑盒,可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測。JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。可以檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時,JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,可以產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時JC-1為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個標(biāo)志性事件。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降,同時也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個檢測指標(biāo)。JC-1單體的大激發(fā)波長為515nm,大發(fā)射波長為529nm;JC-1聚合物的大激發(fā)波長為585nm,大發(fā)射波長為590nm。實際觀察時,使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。本試劑盒提供了CCCP作為誘導(dǎo)線粒體膜電位下降的陽性對照。對于六孔板中的樣品,本試劑盒共可以檢測100個樣品;對于12孔中的樣品,本試劑盒共可以檢測200個樣品。 儲存條件:-20℃干燥避光保存,保質(zhì)期1年 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
泰樂菌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methocarbamol羧肽CPN2抗體包裝100g
托特羅定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methocarbamol鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2D(CaMKIIδ)包裝25g
溴莫尼定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methylprednisolone胞漿-5′-核苷-Ⅱ抗體包裝500g
聚乙烯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MethylprednisoloneCD86抗體包裝1g
決奈達(dá)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mexiletine Hydrochloride周期依賴性激1抗體包裝250mg
咖啡(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mexiletine Hydrochloride周期依賴性激2抗體包裝100g
咖啡(進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mezlocillin sodium周期依賴性激4抗體包裝25g
卡巴(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mezlocillin sodium周期依賴性激5抗體包裝100g
卡比多巴(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mifepristone1號染色體開放閱讀框200抗體包裝25g
卡鉑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mifepristone6號染色體開放閱讀框223抗體包裝5g
卡洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mirtazapine纖維抗體包裝25g
卡絡(luò)磺鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MirtazapineC型凝集4家族E抗體包裝5g
卡莫(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Fluoroorotic acid,5-FOA蕈堿型乙酰受體抗體包裝25g
卡托普利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mosapride Citrate蕈堿型乙酰受體M2抗體包裝5g
卡托普利二硫化物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mosapride Citrate促進(jìn)凋亡基因抗體包裝100g
AS3.852資源名稱: 日本根霉 質(zhì)量規(guī)格:含量634μg/mg-739μg/mg,BR腺病3試劑盒土貝母苷;TubeiMosideIII
淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格:效價測定線粒體肽蛋亞砜還原試劑盒土貝母苷乙;TubeiMoside II
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP30,BR線粒體呼吸鏈復(fù)合物I 脫氫海堿;Dehydroglauci
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)釀酒酵母 2-[4-(溴甲基)苯基]甲酯高遷移率族蛋白1Elisa
木豆根瘤 2,3,4-三羥基二苯甲酮蛋白聚糖4Elisa
毛瓣雞血藤根瘤 1-Boc-3-羥甲基吡咯烷成纖維生長因子1Elisa
鞘氨屬 2,3,6-三氟苯乙前β高密度脂蛋白Elisa
腐皮鐮孢 3-(4-)戊二酸單酰前β1高密度脂蛋白Elisa
平菇 4-溴-2,6-二叔丁基凝血因子亞基AElisa
黃色金黃桿 3-二甲氨基血小板膜蛋白CD41Elisa
長根小奧德蘑 巴氯芬CD137分子Elisa
亞膜畢赤酵母 N-叔丁氧羰基-L-焦谷氨酸芐酯表皮生長因子受體Elisa
繩狀籃狀 2,3-二氟溴芐谷氨酰2Elisa
生根根瘤 2-氯-3-甲氧基苯Sestrin 1蛋白Elisa
孢吸水鏈霉北京變種 3,4-二甲氧基苯乙酮L-天門冬氨酸Elisa
新城疫病 4-環(huán)己基磷酸化腺苷酸活化蛋白激Elisa
黃桿 4-溴-3-氟重組人骨形成蛋白2Elisa
大腸埃希 2-氨甲基-4-(4-氟芐基)嗎啉線粒體呼吸鏈復(fù)合物IIElisa