詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Hoechst 33342 | 10mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
本Hoechst 33342是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。 Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342也常用于普通的細胞核染色,或常規的DNA染色。 Hoechst 33342的大激發波長為346nm,大發射波長為460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結合后,大激發波長為350nm,大發射波長為461nm。 Hoechst 33342溶于水,溶解度可達20mg/ml。用于細胞核染色時,推薦的Hoechst 33342工作濃度為0.5-10μg/ml。 CAS:23491-52-3 分子式:C27H28N6O·3HCl·3H2O 分子量:615.99 儲存條件:-20℃避光,有效期一年。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
磷肌3激(PI3K)英文名稱:PI3K ELISA Kit自噬相關蛋白4D抗體包裝25g
磷化腺苷活化蛋白激(pAMPK)英文名稱:pAMPK ELISA Kit自噬相關蛋白9A抗體包裝5g
磷化細胞外信號調節激(p-ERK)英文名稱:p-ERK ELISA Kit縮C抗體包裝500mg
磷化細胞外信號調節激(pERK)英文名稱:pERK ELISA Kit谷草轉抗體包裝100g
磷化酪蛋白激JAK3(pJAK3)英文名稱:pJAK3 ELISA Kit三磷腺苷結合轉運蛋白G超家族成員5抗體包裝25g
磷化核因子-κB(p-NF-κB)英文名稱:p-NF-κB ELISA Kit三磷腺苷結合轉運蛋白G超家族成員8抗體包裝500g
磷化蛋白激C(P-PKC)英文名稱:P-PKC ELISA Kit酰基脫氫長鏈抗體包裝25g
磷化蛋白激B(P-PKB)英文名稱:P-PKB ELISA Kit酰基脫氫中鏈抗體包裝5g
磷化表皮生長因子受體(pEGFR)英文名稱:pEGFR ELISA Kit酰基脫氫短鏈抗體包裝1g
磷化基末端蛋白激(P-JNK)英文名稱:P-JNK ELISA Kit過氧化物酰基氧化1抗體包裝25g
淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)英文名稱:Lptn/LTN/XCL1 ELISA Kit磷化凋亡信號調節激1抗體包裝5g
淋巴細胞功能相關抗原3(LFA-3/CD58)英文名稱:LFA-3/CD58 ELISA Kit轉化生長因子β誘導蛋白3抗體(半胱和絲富含核蛋白1)包裝1g
亮腦啡肽(Leu-ENK)英文名稱:Leu-ENK ELISA Kit有絲分裂激A/B/C抗體包裝5g
粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)英文名稱:GM-CSF ELISA Kit蛋白酪激ATK抗體包裝1g
粒細胞集落刺激因子(G-CSF)英文名稱:G-CSF ELISA Kit長鏈脂肪連接1/2抗體包裝1g
ASCL2蛋白抗體免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
Hoechst 33342細胞藍色熒光染料雞傷寒沙門氏 2,4,6-三氯喹唑啉雌受體檢測試劑盒
三葉草根瘤 3'-氨基-4'-氟苯乙酮紅生成素檢測試劑盒
鏈霉 DL-氨酰-DL-纈氨酸促紅生成素抗體檢測試劑盒
滑菇 RS-127445 鹽酸鹽促紅生成素受體檢測試劑盒
枯草芽孢桿 1-異基-3-氨基吡咯烷促黃體檢測試劑盒
烯霉素鏈霉 Dimethylammoniumdichlorotri(mu-chloro)bis[(R)-(+)-促甲狀腺受體抗體檢測試劑盒
麥芽糖假絲酵母 4-溴-3-三氟甲基吡唑促甲素檢測試劑盒
枯草芽孢桿 1-溴-3-甲基-2-丁酮促甲狀腺素釋放檢測試劑盒
玫煙色棒束孢 2'-OMe-Ac-C亞磷酰單體促卵泡素檢測試劑盒
玉米大斑病 N-乙酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-甲氧基胞苷促腎上腺皮質釋放檢測試劑盒
栗疫 4-甲基-L-苯氨酸促腎上腺皮質檢測試劑盒
果生鏈核盤 3-甲基-4-促腎上腺皮質釋放因子檢測試劑盒
新月彎孢 4-巰基-4-甲基-2-戊酮促生長釋放檢測試劑盒
腐皮殼 2-氟-6-促胃液素檢測試劑盒
石榴干腐 4'-氨甲基-6-羧基熒光素促酰化蛋白檢測試劑盒