以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Teneligliptin是一種有效的DPP-4抑制劑,競爭性抑制人血漿,大鼠血漿和人重組DPP-4,IC50約為1nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:760937-92-6 純度:99.82% 分子式:C??H??N?OS 分子量:426.58 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
白僵菌轉(zhuǎn)錄因子HES4抗體Human STEAP4(STEAP family member 4) ELISA Kit大鼠鈣激活中性蛋白1(CAPN1)免疫試劑盒
樟疫霉造血干特異性相關(guān)結(jié)合蛋白3抗體Human STIM2 ELISA Kit大鼠鈣非依賴型磷脂A2(iPLA2)免疫試劑盒
醋化醋桿菌HDHD1蛋白抗體Human STIP1 ELISA Kit大鼠鈣調(diào)依賴性蛋白激2(CAMK2)免疫試劑盒
釀酒酵母HDHD2蛋白抗體Human STARD5 ELISA Kit大鼠鈣調(diào)(CAM)免疫試劑盒
檸檬兩面神菌宿主因子1抗體Human STARD3NL ELISA Kit大鼠鈣調(diào)磷(CaN)免疫試劑盒
熱線鏈霉菌組蛋白H2A/S抗體Human EPHA3(Ephrin type-A receptor 3) ELISA Kit大鼠鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激激(CaMKK)免疫試劑盒
膠孢組受體H2抗體Human STK10 ELISA Kit大鼠富亮α2糖蛋白1(LRG1)免疫試劑盒
小孢擬棘殼孢磷化組受體H1抗體Human STEAP2 ELISA Kit大鼠復(fù)制蛋白A 70kDaDNA結(jié)合亞基(RPA1)免疫試劑盒
沉積物假海源桿菌同源盒蛋白HOXA11抗體Human ST3GAL4 ELISA Kit大鼠脯羥化(PHD)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌組受體H1抗體Human STAG2 ELISA Kit大鼠縫隙連接蛋白α1,43kDa(GJA1)免疫試劑盒
黏著玫瑰變色菌同源盒蛋白HOXA9抗體Human STAM ELISA Kit大鼠封閉蛋白4(CLDN4)免疫試劑盒
球孢白僵菌同源盒蛋白HOXB5抗體Human ST5 ELISA Kit大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫試劑盒
球孢白僵菌肝粘附分子抗體Human ST3GAL5 ELISA Kit大鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)免疫試劑盒
雅致放射毛霉磷化組蛋白去乙酰化5抗體Human STARD10 ELISA Kit大鼠肺炎支原體(MP)抗體免疫試劑盒
大腸埃希菌磷化組蛋白去乙酰化1抗體Human ST3GAL6 ELISA Kit大鼠肺炎病抗體(PV-Ab)免疫試劑盒
銅綠假單胞菌磷化組蛋白去乙酰化2抗體Human STAR ELISA Kit大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)免疫試劑盒
曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC)異阿魏
苜蓿中華根瘤菌Sinorhizobium│meliloti 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC, ≥99.5% (GC)雷公藤內(nèi)酯
豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99%(GC)石斛堿
DPP-4抑制劑(Teneligliptin)Adiponectin 脂聯(lián)抗體環(huán)戊烷 99%(GC)
ADM/AM 腎上腺髓質(zhì)抗體4--3-酚 99%
ADM (ProAM-N20) 腎上腺髓質(zhì)抗體(N端20肽)膽固 99%
ADM R 腎上腺髓質(zhì)受體抗體3-酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品
ADNP/NAP 活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體皮質(zhì)甾酮 98%
ADORA3 腺苷受體A3抗體硫化亞銅 99%
ADO 2-氨硫雙加氧抗體天青石藍(lán) 97%
Integrin Alpha V 整合αV抗體α-糖 98%,anomer ca 15%