詳細介紹
商品介紹:
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測細胞在凋亡過程中細胞核DNA的斷裂情況, 其原理是生物素(Biotin)標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3′-OH末端,并可與連接辣根過氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯(DAB)的存在下,產生很強的顏色反應(呈深棕色),特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在普通顯微鏡下即可觀察和計數凋亡細胞;由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3′-OH形成,很少能夠被染色。 二、試劑盒組份 組份 Cat:KFS433 儲存條件 Biotin-11-dUTP 20μl -20℃,避光,12個月 儲存條件:-20℃避光,有效期12個月 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Biotin-11-dUTP | 20μl | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
酚酞(標準品)英文名稱: Levothyroxine Sodium 表面趨化因子受體4相關蛋白2抗體包裝1g
(標準品)英文名稱: Lidocaine肉堿棕櫚酰基轉移2抗體包裝5g
夫拉扎勃(標準品)英文名稱: Lidocaine肉堿氧位基轉移抗體包裝100g
夫西地(標準品)英文名稱: Lidocaine HClIV型膠原α3結合蛋白抗體包裝25g
夫西地鈉(標準品)英文名稱: Lidocaine HCl肉堿棕櫚酰基轉移1B抗體包裝5g
呋喃雜質A(標準品)英文名稱: Lisinopril Dihydrate膽固27α羥化抗體包裝25g
呋喃妥因(標準品)英文名稱: Lisinopril Dihydrate膽固24α7羥化抗體包裝5g
呋喃西林(標準品)英文名稱: Lobeline Hydrochloride色P450 4A1抗體包裝25g
呋喃唑(標準品)英文名稱: Lonidamine色P4504A22抗體(脂肪Ω羥化)包裝5g
呋塞米(標準品)英文名稱: Lopinavir周期蛋白依賴性激抑制劑2D抗體包裝1g
伏格列波糖(標準品)英文名稱: Lopinavir膽固24S-羥化包裝5g
伏格列波糖(標準品)英文名稱: Loratadine豬瘟病抗體包裝100g
伏立康唑(標準品)英文名稱: Loratadine色c氧化亞型2抗體包裝25g
伏立諾他(標準品)英文名稱: Melatonine周期G2抗體包裝5g
胞嘧啶/5-胞嘧啶(標準品)英文名稱: Melatonine銅藍蛋白抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規格:HPLC>98%,標準品信號識別顆粒抗體試劑盒偽原薯蕷皂苷;Pseudoprotodi
黃曲霉Aspergillus│flavus 質量規格:>99.0%,BR信號傳導子及轉錄激活子6試劑盒王不留行黃苷;Vaccarin
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質量規格:HPLC>98%,標準品信號傳導子及轉錄激活子5試劑盒烏藥環戊烯二;Methyllind
生物素標記dUTP溶液(0.25mM)金黃殼囊孢 Gly-Phe-Asp-Leu-Asn-Gly-Gly-Gly-Val-Gly熱休克蛋白aElisa
海角副球 2-乙絲氨酸肽抑制因子Kazal型1Elisa
擬莖點霉 5-硝基-2,3-二氯吡啶氧化應激反應誘導凋亡蛋白Elisa
平田頭菇 5-硝基-2-羥基-3-氯吡啶唾液淀粉Elisa
廣島鏈霉 Olaparib (AZD2281, Ku-0059436)天青殺;肝結合蛋白Elisa
硬結節桿 1-苊酮核酸外切Elisa
果生鏈核盤 4-溴-3-氟芐ATP合6Elisa
異常漢遜酵母變種 3-氟-4-吡啶Trim22分子Elisa
芬娜冬菇 反式-4-甲氧基查耳酮Trim41分子Elisa
枯草芽胞桿枯草亞種 硬脂酸鎘Trim5分子Elisa
特異青霉(產黃青霉) 甲亢平前列腺E代謝物Elisa
血痕韌革 Cyprosulfamide纖維源性蛋白Elisa
鹽古桿 4-苯氧基二氫還原Elisa
高盧蜜環 1-甲基-3-苯基絲氨酸;蘇氨酸蛋白激1Elisa
球孢白僵 2-[[2-(二甲氨基)乙基]甲氨基]乙二酰Elisa