商品介紹:
用途: 腺苷三磷酸酶染色 注意事項(xiàng): 主要由孵育液、、硫化銨、陰性對(duì)照孵育液等組成。酶活性部位呈棕黑色或黑色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:ATPase染色液(鈣鈷法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:5×50ml
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
麻楓樹酚B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: rU Phosphoramidite肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體包裝5g
(草)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bz-rA Phosphoramidite磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體包裝1g
(中)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: i-bu-rG Phosphoramidite絲裂原活化蛋白激13抗體包裝25g
根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dacomitinib多纖毛蛋白抗體包裝5g
麻醉椒苦英文名稱: Ac-rC Phosphoramidite肌管相關(guān)蛋白8抗體包裝100g
麻醉椒英文名稱: Tetrodotoxin巨噬甘露糖受體2抗體包裝25g
馬鞭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetrodotoxin周期G1的相互作用蛋白抗體包裝5g
馬勃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ac-dC Phosphoramidite主導(dǎo)控制樣蛋白3抗體包裝1g
馬齒莧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2,2'-Anhydro-5-Me-U絲裂原活化蛋白激MKK3抗體包裝5g
馬兜鈴(北馬兜鈴)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Deaza-7-I-2’-dGMYSM1抗體包裝1g
馬兜鈴A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Deaza-7-I-2’-dA單羧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體包裝5g
馬兜鈴C英文名稱: Dideoxyadenosine微管相關(guān)蛋白1A抗體包裝10g
馬兜鈴D英文名稱: Xylitol中期因子/肝結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體包裝50g
馬兜鈴II英文名稱: Xylitol鹽皮質(zhì)激受體抗體包裝25g
馬蘭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2',3'-Dideoxythymidine促黑激α抗體包裝5g
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:>98%抗狂犬病試劑盒莪術(shù)二;Germacr-1(10)-e
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品抗狂犬病試劑盒莪術(shù)烯;
匐枝青霉Penicillium│stoloniferum 質(zhì)量規(guī)格:BS抗狂犬病試劑盒1,3-O-二咖啡酰奎寧;Cynari
ATPase染色液(鈣鈷法)大腸埃希 (1-甲基-1H-咪唑-4-基)脯氨酸脫氫Elisa
產(chǎn)黃青霉 尿磷酸鹽△1-吡咯啉-5-羧酸合成Elisa
繩生毛殼 4-硝基酰苯鳥氨酸轉(zhuǎn)氨Elisa
瓊氏不動(dòng)桿 3,3-二甲基戊二酸酸氨基酸合成Elisa
Aurantimonas sp. 3-(二氟甲氧基)13-賴氨酰氧化Elisa
層臥孔 4-氟-3-(羥甲基)苯酸9-賴氨酰氧化Elisa
釀酒酵母 甲苯磺酰基谷氨酸卵磷脂膽固酰基轉(zhuǎn)移Elisa
乳白蘑菇 2-氨基-4-苯基噻吩-3-羧酸乙酯擴(kuò)展蛋白Elisa
聚多曲霉 2-氨基-5-甲基-噻吩-3-甲酸乙酯酯酰合成Elisa
芽孢桿 異啉-1-酮吡咯啉-5-羧酸還原Elisa
綠色木霉 3’,5’-二氯-2’-氟苯乙酮萎蔫病Elisa
囊狀匐柄霉 3-氟-4-異氧基苯基酸1,25-二羥維生D(3)24-羥化Elisa
鮑姆針層孔 5,6-二甲氧基-2-(4-吡啶基)亞甲基-1-茚酮11β羥基類固脫氫Elisa
盔形畢赤酵母 4-苯氧基吡啶17-羥皮質(zhì)類固Elisa
單胞屬 3-溴-5-甲酸甲酯1-磷酸鞘氨Elisa