產(chǎn)品屬性:
中文名稱:細(xì)胞色素氧化酶染色液(對(duì)苯二銨法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×50ml
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
用途: 細(xì)胞色素氧化酶染色 注意事項(xiàng): 主要由Co孵育液、Lugol碘液、硫代硫酸鈉溶液、鈷鹽溶液、陰性對(duì)照等組成,染色后酶活性部位呈棕綠色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
芥子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neostigmine bromideLRRC59蛋白抗體包裝25g
芥子堿英文名稱: MagnolinLRRC41蛋白抗體包裝500g
芥子堿硫鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Racanisodamine促黃體生成受體抗體包裝100ml
金合歡;槐(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfadimethoxine sodium salt乳清蛋白α抗體包裝25ml
金蓮花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfadimethoxine sodium salt核纖層蛋白B2抗體包裝500ml
金毛耳草(黃毛耳草)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Digitoxigenin層粘蛋白α5抗體包裝1g
金錢草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CorynoxineL-瓜抗體包裝250mg
金蕎麥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Urapidil泌乳升高蛋白1抗體包裝25g
金雀花堿,野靛堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fusidate Sodium溶體相關(guān)膜蛋白4α抗體包裝5g
金石蠶苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fusidate Sodium分化相關(guān)基因14抗體包裝1g
金絲桃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrateβ內(nèi)酰樣蛋白2抗體包裝5g
金絲桃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Flucloxacillin sodium神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體包裝1g
金松雙黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Parishin A可溶性半乳糖凝集3結(jié)合蛋白抗體包裝5g
金鐵鎖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Maslinic acid瘦抗體包裝25g
金銀花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Phenylbenzimidazole-5-sulfonic acid磷脂磷酯LPIN1抗體包裝5g
: 3007資源名稱: 山夫登堡沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR抗鞘磷脂抗體試劑盒番瀉苷C;Sennoside C
紫產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│violochromogenes 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品抗鞘磷脂抗體試劑盒附子靈;Fuziline
季也蒙假絲酵母果生變種Candida│guilliermondii var. carpophila 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR抗鞘磷脂抗體試劑盒飛蓬酯乙;Erigoster B
細(xì)胞色素氧化酶染色液(對(duì)苯二銨法)赭鱗蘑菇 2,6-二氟甲苯草酰乙酸Elisa
產(chǎn)氣腸桿 2-氟溶Elisa
簇生黃韌傘 胡椒NAD-蘋果酸Elisa
粉紅單端孢 4-羥基-3-甲氧基苯甲賴氨酰氧化2Elisa
灰樹(shù)花 5-氨基四氮唑賴氨酰氧化3Elisa
大腸埃希氏桿 2,4,6-三乙酸脂肪氧化3Elisa
華麗側(cè)耳(佛羅里達(dá)側(cè)耳) 3-氨基芐巨病Elisa
蘑菇 3-羥基-4-甲氧基苯甲嘌呤核苷磷酸化Elisa
紅冬孢酵母 2-溴甲基-1,3-二氧戊環(huán)甘氨酸Elisa
寇氏隱甲藻 1,1-環(huán)己基二乙酸絡(luò)合合成Elisa
三葉草根瘤 5-羥基-L-色氨酸β-呋喃果糖苷Elisa
大腸埃希氏 3-溴-1-甲基-1,2,4-噻唑α-蛋白Elisa
靈芝 3-氟肉桂β-蛋白Elisa
腸膜明串珠 3-氯肉桂角鯊烯合成Elisa
假單胞 對(duì)甲基肉桂香葉基香葉基焦磷酸合Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)