公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Smoothened激活劑
英文名稱:Purmorphamine
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
Purmorphamine是一種Smoothened的激活劑,氟硼二-環(huán)巴胺與Smo結(jié)合,IC50值約為1.5μM;同時(shí)能夠誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化,EC50值為1μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):483367-10-8 純度:98.47% 分子式:C??H??N?O? 分子量:520.62 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
枯草芽孢桿菌枯草亞種神經(jīng)上皮酪激/癌激10抗體Human MEK3 ELISA Kit免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA Kit
人葡萄球菌MHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物MHCIa抗體Human MEF2A ELISA Kit免疫球蛋白E Fc段受體Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA Kit
冰川金色單胞菌中腦核仁蛋白抗體Human MEIS3 ELISA Kit免疫球蛋白D(IgD)ELISA Kit
褐紅小孔菌巨噬移動(dòng)抑制因子抗體Human MED8 ELISA Kit免疫球蛋白A(IgA)ELISA Kit
紅細(xì)菌屬巨噬炎癥因子1α抗體 MIP-1αHuman MUC5B(Mucin-5B) ELISA Kit免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA Kit
Corynebacterium variabile蕈堿型乙酰膽堿受體M1抗體Human MEKK2 ELISA Kit免疫核糖核(Irna)ELISA Kit
南海雷*氏菌髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體Human MEK3 ELISA Kit免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激(irGH)ELISA Kit
熱橄欖鏈霉菌褐色變種絲裂原活化蛋白激激1抗體Human MEMO1 ELISA Kit糜蛋白(Chymase)ELISA Kit
副豬嗜血桿菌絲裂原活化蛋白激激2抗體Human MEK4 ELISA Kit錳超氧化物歧化(SOD2)ELISA Kit
四川散斑殼蛋白裂解(一種新的癌基因)抗體Human MEN1 ELISA Kit鎂依賴性磷1(MDP1)ELISA Kit
沙漠畢赤酵母髓鞘堿性蛋白/磷脂堿性蛋白抗體Human MEPCE ELISA Kit美洲商陸(PWM)ELISA Kit
灰色鏈霉菌黑色瘤相關(guān)抗原/黑色-A抗體Human ADH1A(Alcohol dehydrogenase 1A) ELISA Kit美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA Kit
點(diǎn)枝頂孢單核趨化蛋白1抗體Human MED12L ELISA Kit錨蛋白B(Ank-B)ELISA Kit
阿舒假囊酵母巨噬克激因子抗體Human MED15 ELISA Kit毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因(ATM)ELISA Kit
朱紅叢赤殼雙微體2癌基因抗體Human MED17 ELISA Kit麥考酚(MPA)ELISA Kit
*蟲擬蠟菌絲蛋白抑制劑B7抗體Human MDM1 ELISA Kit麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)ELISA Kit
高麗菌屬菌種Kribbella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.99原花青
蕈狀芽孢桿菌Bacillus│mycoides 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR柚皮
銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品柚皮苷
Smoothened激活劑phospho-MEK1 (Thr286) 化絲裂原活化蛋白激激1抗體壬 98%
Phospho-MEK1/2 (Ser217/221) 化絲裂原活化蛋白激激1/2抗體1-辛 99%
Phospho-MEK1/2 (Ser221) 化絲裂原活化蛋白激激1/2抗體1-辛 97%
phospho-ERK1/MAPK-1/2(Thr183/185) 化絲裂原活化蛋白激1/2抗體正辛 ≥98%, FG
phospho-ERK1(Thr202/Tyr204) 化絲裂原活化蛋白激1抗體1-辛 ≥92%, FCC
ERK1/2(p44/42 MAPK) 絲裂原活化蛋白激1/2抗體1-辛 natural, ≥92%, FCC
phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) 化絲裂原活化蛋白激1/2抗體丁酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
phospho-ERK1(Thr202/Thr204)+ERK2(Thr183/Tyr185) 化絲裂原活化蛋白激1/2抗體丁酯 99%