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詳細介紹
產品屬性：
中文名稱：TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(FITC)
英文名稱：TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)
產品規格：20T
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
商品介紹：
本試劑盒應用范圍廣，可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。 細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder。 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細胞凋亡檢測試劑盒（FITC）可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基（3′-OH）末端摻入FITC-12-dUTP，從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。 本試劑盒對標記反應進行了優化，采用佳比例的FITC-12-dUTP和未標記dNTP進行3’-OH末端的核苷酸摻入，使得同一個斷裂的DNA片段末端可以形成更長的“標記尾巴"。該“標記尾巴"減少了相鄰摻入dNTP上標記基團的空間位阻，增加每個斷裂片段上的熒光基團數目，降低熒光基團相鄰后可能造成的聚集和淬滅，從而提高檢測靈敏度，減少非特異性反應。 試劑盒組份： 5×Equilibration Buffer————750μl FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl Recombinant TdT Enzyme—————20 μl Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl DNase I (1 U/μl)———————5μl 10×DNase I Buffer——————100 μl 儲存條件：-20℃，有效期一年。 |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
生長分化因子11(GDF11)英文名稱：GDF11 ELISA Kit胞苷尿苷鳥苷結合蛋白1抗體包裝1g
生長分化因子1(GDF1)英文名稱：GDF1 ELISA Kit原腸胚雙向形成相關蛋白抗體包裝5g
滲透性糖蛋白(Pgp)英文名稱：Pgp ELISA Kit分裂周期蛋白CDC123抗體包裝100g
腎足蛋白(NPHN)英文名稱：NPHN ELISA Kit神經蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN3抗體包裝25g
腎臟腦蛋白(KIBRA)英文名稱：KIBRA ELISA Kit趨化樣因子超家族成員3抗體包裝100ml
腎損傷分子1(Kim1)英文名稱：Kim1 ELISA Kit染色質修飾蛋白1B抗體包裝25ml
腎(REN)英文名稱：REN ELISA Kit冷誘導RNA結合蛋白抗體包裝5ml
腎上腺能受體β3(ADRβ3)英文名稱：ADRβ3 ELISA Kit連接相關蛋白1抗體包裝25g
腎上腺能受體β2(ADRβ2)英文名稱：ADRβ2 ELISA Kit連接相關蛋白2抗體包裝5g
腎上腺能受體β1(ADRβ1)英文名稱：ADRβ1 ELISA Kit磷化周期依賴性激5抗體包裝250mg
腎上腺能受體α1A(ADRα1A)英文名稱：ADRα1A ELISA Kit異戊烯半胱羧基轉移抗體包裝1g
神經源3(NEUROG3)英文名稱：NEUROG3 ELISA Kit鳥嘌呤核苷交換因子CLLD7抗體包裝5g
神經元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)英文名稱：NPTX1 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員4抗體包裝25g
神經元特異性烯化(NSE)英文名稱：NSE ELISA Kit趨化樣因子超家族成員7抗體包裝5g
神經營養因子4(NT4)英文名稱：NT4 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員5抗體包裝5g
蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質量規格：純度98%轉錄因子E2F1 紫莖女貞苷B;Ligupurpurosi
玫瑰色庫克菌Kocuria│roseus 質量規格：純度大于98%,USPgrade轉錄因子AP-1 紫莖女貞苷A ;Ligupurpuros
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規格：含量測定,HPLC>99%,標準品轉化生長因子-β誘導蛋白IG-H3試劑盒左旋肉堿; L(-)-Carnitine
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(FITC)梭 5-甲基喹喔林信號3AElisa
腦膜膿性金黃桿 偏酸鎂信號4AElisa
異常漢遜酵母異常變種 甘氨酸鋁性別決定區Y框蛋白2Elisa
鏈格孢 蘋果專化型 5-甲基-2-噻吩甲性結合球蛋白Elisa
釀酒酵母 四羥基二烷胸苷酸合成Elisa
橙色標樁 磷酸三(1,3-二氯異基)酯胸腺活化調節趨化因子Elisa
平菇 L-3-苯基乳酸甲酯胸腺嘧啶核苷磷酸化Elisa
大腸埃希氏 2-甲巰基苯并噁唑胸腺β4Elisa
雙孢蘑菇 3-溴-4-氯苯酚胸腺β4樣蛋白3Elisa
紙葡萄穗霉 2-溴-5-氯苯酚胸腺肽α1Elisa
乳酸乳球乳亞種 3,5-二氯吡啶-4-甲雄烯二酮Elisa
芽孢桿屬 1,1-環基亞磺酸酯嗅質蛋白4Elisa
雙通道計時定時器 2-乙基己酸鋅, Zn, contains 1% diethylene glycol monomet溴脫氧核苷尿嘧啶Elisa
Pseudomonas taiwanensis 1,5-二甲基-2-硝基亞氨基六氫-1,3,5-三血管活性腸肽Elisa
友好戈登氏 二乙基已酸鈣血管緊張1-7Elisa
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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