以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
英文名稱:Pifithrin-α hydrobromide 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg Pifithrin-α hydrobromide是一種p53抑制劑,也用作芳香烴受體(AhR)激動(dòng)劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):63208-82-2 別名:Pifithrin hydrobromide;PFTα hydrobromide 純度:98.28% 分子量:367.3 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母熱休克蛋白J2抗體Human AHR(Aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit人β4整合(ITG β4/CD104)免疫試劑盒
異常漢遜酵母雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激1B抗體Human RHOT1 (Mitochondrial Rho GTPase 1) ELISA KIT人β2轉(zhuǎn)鐵蛋白(β2TF)免疫試劑盒
地中海中慢生根瘤菌*二酰基甘油激5抗體Human RD3 (Protein RD3) ELISA KIT人β2整合(ITG β2/CD11+CD18)免疫試劑盒
慢生根瘤菌DNA依賴蛋白激催化亞基抗體Human RRAD (GTP-binding protein RAD) ELISA KIT人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫試劑盒
青黃褐硬皮馬勃雙同源框蛋白4抗體Human RCCD1 (RCC1 domain-containing protein 1) ELISA KIT人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)免疫試劑盒
釀酒酵母無精癥缺失基因1抗體Human RASAL1 (RasGAP-activating-like protein 1) ELISA KIT人β2糖蛋白(β2-GP)免疫試劑盒
膠孢磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human ANKRD19P (Putative ankyrin repeat domain-containing protein 19) ELISA KIT人β1腎上腺能受體(β1AR)抗體免疫試劑盒
多主葡萄殼菌通道蛋白DRK1抗體Human RCSD1 (CapZ-interacting protein) ELISA KIT人β1,4-N-乙酰基半乳糖轉(zhuǎn)移2(B4GALNT2)免疫試劑盒
蜜蜂生球擬酵母GTP發(fā)育調(diào)控結(jié)合蛋白1抗體Human RCE1 (CAAX prenyl protease 2) ELISA KIT人β,β胡蘿卜9',10'加氧(BCO2)免疫試劑盒
米川黃桿菌骨架4.1蛋白家族DAL1抗體Human RALGPS1 (Ras-specific guanine nucleotide-releasing factor RalGPS1) ELISA KIT人α-烯化(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)免疫試劑盒
平滑假絲酵母DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激2抗體Human REPS1 (RalBP1-associated Eps domain-containing protein 1) ELISA KIT人α戊二脫氫(α-KGDHC)免疫試劑盒
慢生根瘤菌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能磷蛋白DAB2抗體Human RFXANK (DNA-binding protein RFXANK) ELISA KIT人α乳清蛋白(α-La)免疫試劑盒
黃赭色鏈霉菌命運(yùn)決定因子DACH1抗體Human RBCK1 (RanBP-type and C3HC4-type zinc finger-containing protein 1) ELISA KIT人α葡萄糖苷(α-glucosidase)免疫試劑盒
米根霉Dab2相互作用蛋白抗體Human RSC1A1 (Regulatory solute carrier protein family 1 member 1) ELISA KIT人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)免疫試劑盒
食砜節(jié)桿菌線粒體2,4-雙烯酰還原1抗體Human RAP1GAP2 (Rap1 GTPase-activating protein 2) ELISA KIT人α-內(nèi)肽(α-EP)免疫試劑盒
大腸桿菌動(dòng)力蛋白激活蛋白亞基3抗體Human RXFP2 (Relaxin receptor 2) ELISA KIT人α肌動(dòng)蛋白(α Actin)免疫試劑盒
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:100µg/mL,基體: 1%HCl芹菜苷
鏈霉菌(吸類群)Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:濃度范圍:0.959-1.01(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品7-乙基-10羥基
球形芽孢桿菌Bacillus│sphaericus 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml葒草-2"-0-B-L半乳糖苷
p53抑制劑(芳香烴受體激動(dòng)劑)擴(kuò)展青霉 DL-木糖酮酸脫氫激同工1Elisa
大邱螯合球 乙二封端的聚乙烯亞干擾γ誘導(dǎo)蛋白16Elisa
慢生根瘤 6-溴-5-氟-1H-幾丁質(zhì)3樣蛋白3Elisa
肉桂色乳菇 4-羥基硫代苯甲酰肉堿軟脂酰基轉(zhuǎn)移1Elisa
麥根腐平臍蠕孢 (R)-2-(氨甲基)-1-BOC-吡咯烷前列腺酸性磷酸Elisa
矩圓黑盤孢 1,2:5,6-雙-O-異叉基-α-D-異呋喃糖抗肌蛋白Elisa
扁平鏈霉 唑靈Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白Elisa
大腸埃希 (1S,2S)-N,N'-雙(2-乙酰-3-氧代-2-亞基)-1,2-二均苯基乙二合鈷(I受體相互作用蛋白3Elisa
橄欖綠鏈霉 5-氟-2-羥基苯酸谷氨酰半胱氨酸連接調(diào)控亞基Elisa
青春雙歧桿 4-氨基-2,6-二吡啶D-葡萄糖酸Elisa
海藻希瓦氏 1,3-雙(2,6-二異苯基)咪唑啉酮-2-亞基干因子受體Elisa
圈卷產(chǎn)色鏈霉淡色變種 甲氨基乙鹽酸鹽跨膜和泛樣結(jié)構(gòu)域蛋白1Elisa
豬屎豆根瘤 苯炔促胃液Elisa
雜色曲霉 His-Gly軟骨糖蛋白39Elisa
蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 Pro-Gly網(wǎng)膜1Elisa