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詳細介紹
商品介紹：
熒光染料PKH67 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞，通過與膜結構的脂質分子結合而標記細胞。對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，有著強而穩定的綠色熒光。經PKH67標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。 在細胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標記細胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2的熒光強度)，二次(1/4的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。PKH67可檢測分裂次數多達六次甚至更多。 除了用于細胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內示蹤，標記后熒光在胞內表達穩定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注入體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。 PKH67標記的細胞用于體內觀察可以長達數周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準確和更安全地得到想要的實驗數據。 PKH67標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。 PKH67標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。 儲存條件：-20℃避光保存。 |
產品屬性：
中文名稱：PKH67細胞增殖與毒性檢測試劑盒
英文名稱：
產品規格：500T
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
阿利多(標準品)英文名稱： Dexamethasone AcetateCD44V5抗體包裝25g
阿侖磷鈉（標準品）英文名稱： Dexamethasone Acetate22號染色體開放閱讀框23抗體包裝5g
阿莫西林（標準品）英文名稱： Trimethoprim角蛋白19抗體包裝1g
阿尼西坦(標準品)英文名稱： Trimethoprim1號染色體開放閱讀框147抗體包裝5g
阿齊沙坦(標準品)英文名稱： Sivelestat sodium 膽固21-羥化抗體包裝1g
阿奇霉（標準品）英文名稱： Nevirapine畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端)包裝25g
阿米特（標準品）英文名稱： Nevirapine補體C1qL3鏈多肽抗體包裝5g
阿司咪唑(標準品)英文名稱： Sulfamethoxazole(SMZ)腫瘤/抗原27抗體（高遷移率族蛋白）包裝100g
阿糖腺苷(標準品)英文名稱： Sulfamethoxazole(SMZ)1號染色體開放閱讀框228抗體包裝25g
阿替洛爾（標準品）英文名稱： Cefpirome Sulfate碳酐3抗體包裝5g
阿托伐醌,阿托喹（標準品）英文名稱： Cefpirome Sulfate親環蛋白（親環）PPIA抗體包裝1g
阿魏鈉(標準品)英文名稱： Amisulpride鈣網蛋白抗體包裝250mg
阿魏哌（標準品）英文名稱： Amisulpride腫瘤/抗原65包裝5g
阿西美辛(標準品)英文名稱： Fenofibric acid2號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
阿昔莫司，阿西莫司（標準品）英文名稱： Fenofibric acid伴侶蛋白9抗體包裝5g
大腸埃希菌Escherichia│coli 質量規格：>98.0%,BR,可用于培養血管生成4試劑盒Α-香樹脂;α-Amyrenone
沃遜納爾沙門氏菌Salmonella│wassenaar 質量規格：HPLC>98%,標準品血管生成2試劑盒相思豆;L-Abrine
: HBUM84819資源名稱: 鏈霉菌 質量規格：>98.5%血管生成1試劑盒相思子堿;L-Abrine
PKH67細胞增殖與毒性檢測試劑盒德沃斯氏 乙二二縮水甘油拓撲異構1Elisa
Burkholderia metallica Vanlaere et al. 對乙氧基苯酸單酰基甘油酯Elisa
泡盛曲霉 5-二苯并環庚烯酮單酰基甘油酯Elisa
枯草芽孢桿 萘普生SIGMAR1Elisa
假單胞 亞氨乙氧基乙烷 鹽酸鹽敏感性脂肪Elisa
大莖點 酮基布洛芬脂肪甘油三酯脂Elisa
仁果叢梗孢 5-氟-2-甲血管生成樣蛋白4Elisa
枯草芽孢桿 N-甲基-4-氯-2-吡啶甲酰甲酰肽受體1Elisa
美澳型核果褐腐病 1,3,5-三(溴甲基)-2,4,6-三蛋白信號調節因子7Elisa
橄欖色盤多毛孢 硫代異煙酰II型膠原纖維α基因Elisa
黑曲霉 2,3-二氯苯肼鹽酸鹽腸道病71型IgG抗體Elisa
白地霉 2-氨基-4-甲基-5-硝基吡啶神經絲蛋白HElisa
岸海桿狀 2-氯-4-氟苯甲酰氯橋粒芯糖蛋白2Elisa
2-氨基聯苯鹽酸鹽分泌簇集蛋白Elisa
腸桿屬 四溴雙酚A-雙(2,3-二溴基)CD20分子抗體Elisa
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