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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-21 14:29:30瀏覽次數(shù)：221
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100mg |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9753 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Collagenase III |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Collagenase III | 100mg | 1～3天 |
商品介紹：
本品為III型膠原酶，≥100 U/mg solid，常用于乳腺細胞和胎兒細胞的制備。 本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白，多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。 膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。 目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應(yīng)用上有所偏向： 1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備； 2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備； 3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備； 4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。 分子量：68-130 kDa 激活劑：Ca2+、Zn2+ 抑制劑：EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum 活力單位：在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當于1μM L-亮氨酸的酶量定義為1個酶活力單位。 儲存條件：4℃避光，有效期兩年 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
洛莫司汀（標準品）英文名稱： Adenosine-5'-diphosphate disodium salt(ADPna)CD8抗體包裝1g
洛匹那韋（標準品）英文名稱： Adenosine 5'-(trihydrogen diphosphate)/ADP表面趨化因子受體2抗體包裝100g
洛索洛芬鈉（標準品）英文名稱： Saxagliptin monohydrate胱抑B/半胱蛋白抑制劑B抗體包裝25g
麻保沙星;馬波沙星(標準品)英文名稱： Ganciclovir趨化樣蛋白抗體包裝5g
馬來地平（標準品）英文名稱： Ganciclovir角蛋白20抗體包裝100g
馬來吡汀(標準品)英文名稱： 5,6-Dimethoxy-1-indanone鈣激活的中性蛋白2抗體包裝25g
馬來伏沙明（標準品）英文名稱： PaeoniflorinCD45RO抗體包裝100g
馬來桂哌齊特(標準品)英文名稱： Paeoniflorin嗜中性粒抗原CD177抗體包裝25g
馬來那敏/撲爾敏(標準品)英文名稱： Paeoniflorin鈣整合結(jié)合蛋白1抗體包裝5g
馬來曲美布汀（標準品）英文名稱： Paeoniflorin21號染色體開放閱讀框7抗體包裝100g
馬來噻嗎洛爾（標準品）英文名稱： Paeoniflorin磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝25g
馬來替加色羅（標準品）英文名稱： 5-Hydroxytryptophan磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝5g
馬來溴那敏(標準品)英文名稱： 5-HTP磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝1g
馬來依那普利（標準品）英文名稱： Rivastigmine tartrate磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝5g
嗎多明（標準品）英文名稱： Rivastigmine tartrate磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝25g
小單孢菌Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP色c氧化亞基5A,線粒體試劑盒土荊皮乙;Pseudolaric Ac
馬爾他布魯氏菌 生物Ⅰ型Brucella│melitensis BiovarⅠ 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品色c氧化Ⅵα亞基多肽1試劑盒塔拉薩敏;Talatisamine
LMG27494T=CGMCC1.12516T資源名稱: 芽孢八疊球菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于培養(yǎng)色C氧化試劑盒天麻;Gastrodin
膠原酶III型釀酒酵母 溴化吡斯的明肺炎衣原體IgA抗體Elisa
靈芝 3-羥基二苯基結(jié)核抗體Elisa
污水水微 3-甲氧基二苯血小板膜表面相關(guān)抗體IgGElisa
豐加鏈霉灰白亞種 鹽酸米那普侖周期蛋白依賴性激2Elisa
異配囊接霉 1-(2-氟苯基)哌周期依賴性激4Elisa
短芽孢桿 5-甲基色鹽酸鹽周期依賴性激5Elisa
金針菇 N,N-二芐基乙周期蛋白依賴性激2Elisa
解脂鹽紅 1,2-二溴-3,5-二氟苯周期依賴性激4Elisa
鴨疫里氏桿 四水合磷酸鉻(III)周期依賴性激5Elisa
南類芽孢桿 氧氟沙星羧酸周期依賴性激11Elisa
猬木霉 1,4-二乙酰基苯表皮生長因子受體Ⅲ型突變體Elisa
溶血不動桿基因型4 1-(4-吡啶基)哌白介6受體αElisa
貝倫格葡萄座腔 2-甲氧基-4-甲基吡啶超敏肌鈣蛋白IElisa
鴨疫里氏桿 1-甲基-3-氯-4-甲氧羰基吡唑-5-磺酰氧鯊烯環(huán)化Elisa
抗生鏈霉 5-氯-2-并噻唑氨基端前腦鈉Elisa
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