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Caspase 6熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20T|50T|100T
貨號(hào) GOY-01X9577 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅供科研 英文名稱(chēng) Caspase-6 Fluorescence Metric Assay
Caspase 6熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)公司*的產(chǎn)品:CBP/CREBBP CREB結(jié)合蛋白抗體草 ≥99.9999% (metals basis)
HP1 gamma 異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體四十八烷 Standard for GC,≥99.0% (GC)
Phospho-HP1 gamma (Ser83) 化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體α-氧代-2-呋喃 97%
CBX5 CBX5

詳細(xì)介紹

商品介紹:

本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織Caspase-6 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用,其中Caspase-6 為關(guān)鍵分子,與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-6 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒(méi)有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段,它被激活,活化的Caspase-6 裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-6熒光檢測(cè)試劑盒就是將Caspase-6 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán)。當(dāng)?shù)孜锉籆aspase-6 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來(lái),可通過(guò)熒光酶標(biāo)儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)=485nm,發(fā)射波長(zhǎng)=535nm)。

注意事項(xiàng)

1. Caspase-6 Substrate 避光保存及使用。

2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴(lài)于Caspase-6 活化的機(jī)制,這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-6 活性無(wú)明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。

3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50~100mg,以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求,因?yàn)镃aspase-6 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的RFU 值偏低,可以通過(guò)適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)的時(shí)間,如果值還是不高,可通過(guò)增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來(lái)提高蛋白量。

產(chǎn)品屬性:

中文名稱(chēng):Caspase 6熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)

英文名稱(chēng):Caspase-6 Fluorescence Metric Assay

產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T

發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;

②生物膜與細(xì)胞器的研究;

③細(xì)胞骨架體系的研究;

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

胞內(nèi)離子通道蛋白1(CLIC1)英文名稱(chēng):CLIC1 ELISA Kit粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝500g

胞漿型磷脂A2(cPLA2)英文名稱(chēng):cPLA2 ELISA Kit卡爾曼綜合癥基因1抗體包裝100mg

半乳糖凝集-3(Gal-3)英文名稱(chēng):Gal-3 ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族7抗體包裝1g

半乳糖6硫酯(Gal-6S)英文名稱(chēng):Gal-6S ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族17抗體包裝1g

半胱天冬蛋白(caspase-3)英文名稱(chēng):caspase-3 ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族12抗體包裝5g

半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)英文名稱(chēng):Cys-C ELISA Kit鈉ATP通道蛋白抗體包裝1g

百白破抗體(DPT)英文名稱(chēng):DPT ELISA KitAGXT2L2蛋白抗體包裝25g

白血病抑制因子受體(LIFR)英文名稱(chēng):LIFR ELISA Kitβ淀粉樣蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白1抗體包裝5g

白血病抑制因子(LIF)英文名稱(chēng):LIF ELISA Kit錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體包裝1g

白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)英文名稱(chēng):ALCAM ELISA Kit二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移3抗體包裝250mg

白三烯E4(LTE4)英文名稱(chēng):LTE4 ELISA Kit二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移5抗體包裝1g

白三烯D4(LTD4)英文名稱(chēng):LTD4 ELISA Kit腺苷單磷脫1抗體包裝5g

白三烯C4(LTC4)英文名稱(chēng):LTC4 ELISA Kit紅蛋白Ank1抗體包裝1g

白三烯B4(LTB4)英文名稱(chēng):LTB4 ELISA Kit腺苷琥珀裂解抗體包裝100g

白介9(IL-9)英文名稱(chēng):IL-9 ELISA Kitα1B糖蛋白抗體包裝25g

血管緊張?jiān)贵w骨成型蛋白2(BMP2)Reversine 是一種ATP-競(jìng)爭(zhēng)性的 Aurora kinase 抑制劑,作用于 Aurora A,Aurora B 和 Aurora C,IC50 分別
Caspase 6熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)土曲霉 2-溴甲基-4-甲氧基甲酯結(jié)合珠蛋白檢測(cè)試劑盒

膠孢 二氫獼猴桃內(nèi)酯結(jié)核桿IgG抗體檢測(cè)試劑盒

傳染性支氣管炎病 3,4-二氟苯-1,2-二睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子檢測(cè)試劑盒

根霉屬的 4-氯異喹啉解脲脲原體抗體檢測(cè)試劑盒

猴頭 2-氯甲基-3-甲基-4-(3-甲氧氧基)吡啶鹽酸鹽解整合素樣金屬蛋白酶12檢測(cè)試劑盒

色褐鏈霉 鹽酸去甲苯福林解整合素樣金屬蛋白酶33檢測(cè)試劑盒

*美味牛肝 2-氟-3-基-4-吡啶解整合素樣金屬蛋白酶9檢測(cè)試劑盒

香菇 4,5-二溴-1H-1,2,3-三氮唑金黃色葡萄球腸素檢測(cè)試劑盒

魯氏毛霉 1-甲巰基環(huán)基乙酸甲酯金黃色葡萄球腸素A檢測(cè)試劑盒

糾纏青霉 1-羥甲基環(huán)基乙金黃色葡萄球蛋白A檢測(cè)試劑盒

腐皮鐮孢 四氟酸亞鐵(II)金葡腸素檢測(cè)試劑盒

阿舒多囊霉 4-甲基-2-正基苯并咪唑-6-羧酸金屬硫蛋白檢測(cè)試劑盒

淡紫紫霉 2-正基-4-甲基-6-(1-并咪唑-2-基)苯并咪唑金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1檢測(cè)試劑盒

玫紅假裸囊 5-氨基-1,2,4-噻二唑鹽酸鹽金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白5檢測(cè)試劑盒

乳酒假絲酵母 3,4-二甲基(2,3-b)-噻吩-2,5-二羧酸二乙酯緊密連接蛋白檢測(cè)試劑盒 

 


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