以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
本試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-1是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan(參考下圖)。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。 WST-1是MTT的一種升級替代產品,和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先,MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液來溶解;而WST-1和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的,可以省去后續的溶解步驟。其次,WST-1產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次,WST-1比XTT和MTS更加穩定,使實驗結果更加穩定。另外,WST-1和MTT、XTT等相比,線性范圍更寬,靈敏度更高(參考下圖)。 本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測,也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測,或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測等。 本試劑盒檢測非常便捷。無須使用同位素,所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞,不必收集細胞,也不必采用額外步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測。 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。WST-1對細胞無明顯毒性。加入WST-1顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀板,使檢測時間更加靈活,便于找到佳測定時間。 注意事項: 由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發的問題。一方面,由于96孔板周圍一圈容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
胰島原(PI)英文名稱:PI ELISA Kit磷化系統性紅斑狼瘡先關蛋白TREX1抗體包裝1g
胰島樣生長因子結合蛋白6(IGFBP-6)英文名稱:IGFBP-6 ELISA Kit磷化系統性紅斑狼瘡相關蛋白TREX1抗體包裝1g
胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)英文名稱:IGFBP-4 ELISA Kit接頭相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體包裝25g
胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)英文名稱:IGFBP-2 ELISA Kit磷化接頭相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體包裝5g
胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)英文名稱:IGFBP-1 ELISA Kit膜粘連蛋白7抗體包裝100g
胰島樣生長因子2(IGF-2)英文名稱:IGF-2 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框15抗體包裝500g
胰島樣生長因子1受體(IGF-1R)英文名稱:IGF-1R ELISA Kit載脂蛋白B受體抗體包裝25g
胰島樣生長因子1(IGF-1)英文名稱:IGF-1 ELISA Kit三磷腺苷結合盒轉運蛋白2抗體包裝5g
胰島受體β(ISR-β)英文名稱:ISR-β ELISA Kit載脂蛋白B抗體包裝1g
胰島降解(IDE)英文名稱:IDE ELISA Kit花生四烯15脂氧合2抗體包裝25g
胰島(INS)英文名稱:INS ELISA Kit載脂蛋白C4抗體包裝5g
原激活肽(TAP)英文名稱:TAP ELISA Kit低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體包裝1g
1(trypsin-1)英文名稱:trypsin-1 ELISA Kit原始廣泛存在蛋白1抗體包裝250mg
(trypsin)英文名稱:trypsin ELISA Kit錨蛋白重復結構域蛋白37抗體包裝5g
胰α淀粉(AMY2A)英文名稱:AMY2A ELISA Kitα1,4-半乳糖基轉移1包裝25g
激活受體2B抗體程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)Rucaparib phosphate (AG-014699 phosphate) 是一種有效、可口服的 PARP 抑制劑,結合 PARP1 的Ki 為 1.4
細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)枯草芽胞桿 京尼平CD14分子檢測試劑盒
耐熱拉錢斯氏酵母 柚皮素CD163分子檢測試劑盒
長枝木霉 酚CD20分子檢測試劑盒
細小不動桿 2,4-二氯苯甲CD28分子檢測試劑盒
凍土毛霉 梔子苷CD30分子檢測試劑盒
枯草芽孢桿 D-(-)-赤蘚糖CD38分子檢測試劑盒
新城疫病 大豆低聚糖CD3分子檢測試劑盒
醋酸鈣不動桿 低聚乳果糖CD40分子檢測試劑盒
高溫放線 化汞CD40配體檢測試劑盒
枯草芽孢桿 4-基-α-D-吡喃鼠李糖苷CD44變體6檢測試劑盒
短桿屬 金雀花堿CD44分子檢測試劑盒
冬蟲夏草 絞股藍皂苷CD4分子檢測試劑盒
釀酒酵母 黃芪甲苷CD8分子檢測試劑盒
繡球* 槐果堿CD蛋白(損壞性關節炎)檢測試劑盒
大腸桿 5-甲基-2-氨基-3-硝基吡啶CIP2A檢測試劑盒